关于脐带消化的问题

西瓜太郎

回复 wuxiao101325 的帖子
$ U0 J$ S1 g: ^+ ]# j. ^, p( V8 w4 y+ B# `' ?! [' p
你好，你的试验中提到“加入 4ml 的消化液（含 0.25%胰酶，200~400U8 p, Q' d' n6 }9 W
胶原酶Ⅱ/ml的PBS 液） ，混匀，37℃中消化1 小时，每隔10 分钟振
7 I/ h3 a" U6 j( W' A: N, I摇一次”。我想问一下，你的4ml消化液具体是怎么配置的？因为我是才做实验的，也许这个问题很简单，但是。。。
) e* c3 e. P4 r7 h 谢谢你赐教啊

柏林小杨

回复 9# 157238360jwj 6 l3 T) Q8 s0 a! F2 _0 Q( N
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    请问你们消化之后细胞悬液还粘稠吗？细胞得率能到多少？

xiaodiao123

我也只用胶原酶消化，用量较大，时间比较长，学习了

157238360jwj

我们用的是（胶原酶1+透明质酸酶+Dispace）全是2mg/ml,胶原酶1加2ml，其余两种加1ml,37度培养箱20小时。。

penny200903

“两头用动脉夹夹住或丝线扎紧”请问这样做所起的作用是什么？这样有利于把间充质消化出来吗？

niyou

我们用的是0.1% 2型胶原酶+0.05%胰酶（Gibco,含0.02%EDTA）1:1混合，37度消化30分钟。注意脐带保温及无菌操作，两头用动脉夹夹住或丝线扎紧，放入预温的无菌大培养皿（加有37度PBS）中，37度培养箱中放30分钟。水浴锅太脏，尽可能不用。

wuxiao101325

http://www.stemcell8.cn/viewthread.php?tid=18220&extra=

wuxiao101325

据我们实验室的经验，双酶法与单酶法（过夜）效果差不多，也没见细胞有什么明显的损害

wuxiao101325

你所说的损害是否细胞不生长或长得少？

zhujiang007

回复 2# wuxiao101325
0 w1 z3 R; i) F2 A+ Q9 ^" [. L- D/ Q* a" e; n

$ c' V8 k. @- k: f    你用的是双酶法，胰酶的作用力很强，稍有不慎会对细胞损害，我只用胶原酶消化，但是量非常大，时间很长，你有何想法？