骨髓间充质干细胞的分离培养问题

bingo

我们做大鼠骨髓间充质干细胞有几年了，都是自己分离原代细胞，用的percoll密度梯度离心法，在percoll液和培养液的分层处都会看到效果很好的白膜层。但近段时间不知道什么缘故，白膜层基本分辨不出来。我们也重新更换了percoll,NaCl,都不见效果。大家帮忙分析下原因，提供一些解决办法吧！或者分享一下提MSCs的protocal 谢谢大家了！！！

科学家

回复 1# bingo
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    我也在做骨髓间充质干细胞，但不是用离心分离的，是用贴壁法分离的哈

bingo

贴壁法应该就是全骨髓法吧，这种做法感觉瓶子中的液体很脏，什么东西都有。不如percoll法做出来的干净啊。

bingo

回复 2# 科学家
4 m. u. @$ b1 [+ y8 D( M, m: w& x" Z1 s+ w' d8 i; l
6 O8 N9 o2 z# D3 P
    是全骨髓培养吗？

aphple85

我用淋巴细胞分离液分的，采用全骨髓贴壁培养法，效果还挺好的呀

bingo

回复 5# aphple85
9 i1 J. H' n$ d1 M 你说的方法就是密度梯度离心加贴壁培养吧，是不是和我说的是一个意思啊，你们的是中间有白膜层吗？

aphple85

回复 6# bingo
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    是的，离心后分4层，第一层血浆，第二层就是你所的白膜层（比较少），第三层是淋巴细胞分离液，第四层就是血细胞，只取第二层，用10%胎牛血清的L-DMEM培养，一个星期后换液去除非贴壁细胞。

bingo

回复 7# aphple85 ( E: Z- Y7 @2 u6 ?: w
$ O( ?. G* _4 D$ T

  j0 n, s" r% @/ x& m+ o& M   谢谢您，请问能否照张照片让我看一下样子。因为我们从上到下的分层是粉红色的培养基——白膜——percoll——离心到管底的血细胞什么的一团团样的东东。对于您所说的血浆层不太了解，是不是就是我们那种混合了培养基的那层啊。还有就是您分离出的白膜层界限明显吗？是用多大的转速离心出来的？首次换液要一个星期才换吗？问题比较多，谢谢您了！

missyoudad

10min,500×G，然后再进行一次密度梯度离心，取交界面的物质

bingo

回复 9# missyoudad , _" V8 s( C: y8 D
不好意思，您的回复我没看懂，10min 500g的离心是在什么时候？然后再进行一次密度梯度离心是在刚才提到的离心之后？离心转速是多少？离多长时间呢？谢谢！