如何将胚胎干细胞和支持他生长的饲养层分离开来？

sniper

我也正在做这一步实验，师兄说挑出细胞集落，消化成单个的细胞就可以用了

ssuwhite

ssuwhite

本人也是个菜鸟，但看到师兄做的可以用机械法分离。我看到的文献，是用胶原酶分离。

mominglily

回复 10# 可怜的孩子
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    对，是丝裂霉素处理过后的MEF，且是已经支持mES细胞生长以后的MEF，在mES传代或冻存或者用mES细胞来做MTT试验需要对mES细胞计数埋板时，想把原来支持mES生长的feeder去除掉，这样埋板时的mES细胞就会比较纯粹一点。

mominglily

回复 11# starlight
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嗯，也有考虑过用无饲养层培养的方法，但目前仍限于用有饲养层的培养方法。
* T5 F- N. M8 I还有就是延长沉降时间，具体需要延长多久呢，我担心沉降久了mES细胞也会贴壁了，那样的话将会损失不少干细胞呢！

mominglily

回复 12# zpzp0312
' {) c) t8 v1 V- M( ]) T! }+ {$ H" U$ X" ]$ N+ d

$ B8 C, T$ H7 W1 c9 f    请问怎么挑取单个集落啊？从来没试过勒，请教下！谢谢！

ssuwhite

学习下

zpzp0312

挑取单个击落进行消化& V  E5 J$ M/ c" l8 t8 F8 ~
单个集落的细胞数目足够满足实验需要

starlight

我也是采用差速贴壁的方法，沉降时间可稍微长点吧，另外也可考虑用无饲养层条件培养

可怜的孩子

“对于mES细胞和MEF feeder如何分开来，我们实验室一般采用差速贴壁的方法，MEF feeder1h左右在明胶包被的皿上有70-80%贴壁，而ES细胞基本不贴。”7 U6 s6 R" z5 G+ K
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丝裂霉素处理过的MEF吗？