本人准备做实验，请各位老师给我看下我的实验方案

chenziqiu

各位老师我是一名准备做实验的临床小硕，准备做BMSCs向神经元样细胞分化的实验，看了文献后感觉很迷茫，几乎每篇文献的提取分离方法都不一样，实在不知道咋办，我看了一篇文献用下面的方法分离和纯化，想请各位老师帮我看看是否可行，或者您们能推荐一个比较好的方法（取老鼠的最好），谢谢，哦还有，最好能把方法细化一下，因为我几乎没接触过细胞培养，有劳了
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1 BMSCs获取8 E. O" j) \3 L2 i0 L% b; ^8 i
1.1 取3月大SD大鼠，麻醉后处死，无菌操作取双侧股骨、肱骨，截断后用DMEM培养液反复冲洗骨髓腔，用无菌PBS（pH 7.4）将采集的肝素抗凝骨髓1：1等体积稀释。1 f/ z4 |! n0 i# L- H" z! y* w- O
1.2 加在密度为1.077g/cm3的淋巴细胞分离液上，1800r/min离心20min，取单个核细胞层，PBS洗2遍。在细胞沉淀中加入DMEM/F12培养皿中，在CO2培养箱中培养。
# }& R/ }2 Y2 t8 F+ d1.3 24h半量换液，以后每两三天换液1次，细胞长满80%-90%汇合时用2.5g/L胰酶（含0.2g/L乙二胺四乙酸）消化转代，1：4传于新的培养甁中，原代培养结束。传代培养细胞长满后按照1：3或1：4传代，不同代次的细胞均用a-MEM+体积分数为0.2的胎牛血清+10%二甲基亚砜冻存，在倒置显微镜下对细胞生长和形态进行动态观察，直至获得排列呈漩涡状、贴壁生长的长梭形BMSCs。
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2 BMSCs鉴定
# @3 Y8 x! m2 q5 r9 r. m9 |, |2.1 生长情况及形态观察：采用倒置显微镜并通过显微摄像技术记录原代及传代培养的BMSCs生长和形态动态观察，直至获得排列呈漩涡状贴壁生长的长梭形BMSCs。
$ ?6 \7 i4 t0 ~, s9 e$ q7 m2.2 细胞表型的鉴定：倒置显微镜下逐日观察原代及传代细胞的生长情况和形态特征，收集第二代培养的细胞，用25%戊二醛与4℃下固定过夜：按标准SABC检测试剂盒说明进行免疫化学实验，检测CD34、CD44、CD54、CD68、CD71抗原表达。