状态很差的SD大鼠MSC成功转染，有无什么办法补救的！

yzc820215

我养的一批SD大鼠MSC，成功进行了慢病毒转染，但是细胞的状态很差，请问各位大侠有无补救的方法！

xuhaoxiao

可能细胞密一点会好一些* [8 h/ E/ ]6 Y4 H% d
我转导小鼠MSC，密度有点低，结果几天不见长。; C, [8 @* u4 _7 k/ E2 d0 w
后来密度高了一些，效果好多了。

开心果王

恩，我也同一楼的说法，建议楼主下次将细胞密度提高一些在感染一次试试！可能是与细胞旁分泌机制有关，可以加一些bFGF试试，应该会有改善！

have-a-rest

刚转染的细胞状态一般不会很好。7 W0 B# U7 _) \5 s
建议这种密度不需要太勤换液，2天一次足矣。也不要老去观察，拍照，给细胞一个安静的生长环境，他们会缓过气来的！！
$ @0 e- h" H9 i5 S& e# o; V+ S% [祝顺利！

aphple85

回复 4# have-a-rest & @) |! E/ m) q
- I( q% r; @' f  p. j
0 Z( N4 ?# u" M4 s2 k: l3 b
   你好，请问一下，你有没有做过用逆转录病毒感染悬浮细胞，能不能介绍一下具体操作，感染贴壁细胞的也行，谢谢！

xuhaoxiao

1 S, C5 i& S4 R9 l$ d
$ c6 L! I5 x, N% |回复 5# aphple85
- `& m5 ^: i$ l% }3 b& Y, S 我帮同学转导过THP-1, 就是直接向细胞悬液里面加入病毒，可以加一点polybrene，放回培养箱，24小时换液。
! f) W  g& G5 {  |9 i( E# W" u$ R大概加50ul未浓缩过的病毒上清就可以到90%以上感染率。
2 w6 V# N  K' u) z4 {+ K7 H祝好运！
  q2 ?$ B' G, o' l1 k# X2 I& w5 F9 J
另外，转导后老是长的速度明显低于为转导细胞，建议直接扔掉，重新感染。

have-a-rest

回复 5# aphple85 ' f2 ?+ |. u5 `1 A( M+ P+ x, x& Y' D

7 s- P' |1 p! Z5 K1 V' C' \, n, p
    用病毒感染细胞，其实我做的不多。
; q, R  l& B8 P9 D" t我觉得主要是得到合适滴度的病毒，根据细胞类型算算每个细胞能有多少个病毒去感染。感染的方法可以先悬浮，几个小时以后贴壁培养就是了。再后面就是筛选或分选纯化了。病毒感染过的细胞开始状态会不好，调养一段时间会好起来的。不过有些细胞感染效果很差，我最近也正在为感染ES而为难呐！

aphple85

回复 6# xuhaoxiao ) z( u: |  \" t( I2 w' N

! s- c8 W% n+ j' {. N5 L5 |  谢谢啦，我转过K562细胞（悬浮细胞），也是加polybrene,不知道是操作的问题还是其他的,效果不好，我再试试，呵呵

aphple85

回复 7# have-a-rest
5 _( D7 @7 o* N0 T  a
) B: R) {4 |3 ?: p1 R* C& M- v9 f  d: y! R2 }; V
    多谢啦，呵呵

hansey

回复 6# xuhaoxiao
. d5 U% U+ f8 `. Z+ Y9 T% U& J" J6 G' u! r* ^/ G& H
请问你们用的包装逆转录病毒的包装细胞跟体系是什么？谢谢！！