小鼠胚胎干细胞培养时MEF灭活程序？

zhangdagou

有用MEF来养小鼠胚胎干细胞的么？大家是：MEF冻存--复苏--把MEF种植在明胶包被的培养瓶——灭活——种植干细胞，  还是：MEF灭活-冻存--复苏种植在明胶包被的培养瓶--种植干细胞     知道的说一下 不甚感激
: w9 H' t# q/ ^9 Q9 l* c! A问题意思是：MEF先灭活后种植在包被明胶培养瓶还是MEF先种植后灭活？

zhbshi998

我们做的是直接取小鼠胚胎成纤维细胞原代培养，12.5d的可以戴细胞铺满后直接用原代，丝裂霉素C处理后，就可以做饲养层了，13.5-14.5d的一般传代3-5代使用。

上海过客

这个 就买 海正的 丝裂霉素吧 ，非常便宜 。

tangxiao

下载学习了，谢谢！  B  h: G) K* Z5 |6 B' V! x
请问用哪家的mmc，划算些哦？Sigma ，太贵了!!!

polato

相比于射线灭火的和经过丝裂霉素灭活的具有以下三大优点：$ R; Z) h* p9 R
γ-radiation 处理，完全灭活，不含有毒成分，环保健康。目前用于制作MEF的丝裂霉素-C有以下缺点：A、长期接触丝裂霉素-C，药物毒性将严重影响操作人员的身体健康；B、丝裂霉素-C溶液的不稳定，在冷冻保存的条件下，也会快速降解，导致处理的细胞不能完全失活，严重影响后面实验分析；C、丝裂霉素-C的残留，将严重影响ES细胞的状态，痕量的丝裂霉素-C也会导致ES细胞增殖抑制和分化。而γ射线照射处理的MEF细胞将不存在此类问题。

polato

! Y' w. ?; Z* ^6 b5 @4 y- r* s; X; h5 ]/ W  F2 Y/ w- g
直接买灭活的MEF就可以了
; }9 m& t% {; U) e' n# C& ?' B赶上促销的时候，100快就可以买上一支10^6规格的

sniper

灭活
  d- a) w+ m% R7 T1 {       
1 B0 M% w3 M$ i0 r+ Y2 ?（1）        放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个内装200 ml自来水的血清瓶，插入一根温度计，温度监控以此为准）；
( y0 x. k" A' X. h" I（2）        当温度计显示56℃时，控制在此温度30分钟±3分钟；若不小心使温度上升超过56℃，则：若仍未超过60℃，且时间很短（比如：不超过5分钟），则仍可使用；若超过60℃，或者时间较长，则弃去不用- ^5 k) w5 E& [8 ~% o: _* G
（3）        取出，自然冷却至室温（约需1－3小时），可分装或－20℃继续冻存；

czzhaozhu

我比较过两种方法，得出的经验是MEF原代冻存，复苏后经丝裂霉素灭活再种植效果更好！

jiejesse

正是所求

cortex

都也可以，只不过先种植，后灭活。需要充分洗涤，尽量将MMC洗干净。