小鼠胚胎干细胞培养时MEF灭活程序？

zhangdagou

有用MEF来养小鼠胚胎干细胞的么？大家是：MEF冻存--复苏--把MEF种植在明胶包被的培养瓶——灭活——种植干细胞，  还是：MEF灭活-冻存--复苏种植在明胶包被的培养瓶--种植干细胞     知道的说一下 不甚感激1 w/ ?# D7 P6 m0 O' Y" o
问题意思是：MEF先灭活后种植在包被明胶培养瓶还是MEF先种植后灭活？

上海过客

这个 方法差不多 ，还可以

hai1986

学习一下

jjin

有时候我MEF多了，就是MMC处理完冻存，短期内可以解冻铺板再用。不一定一切按操作规程的。

ppcl2

两个没啥大区别，不过最好的是取胚做新鲜的MEFs，传代两次以内，MMC处理或IR处理后直接使用，这样效果最佳。不过建立新的干细胞系最好这样，对于传代培养已建系干细胞，则没有必要，冻舒feeder就可以了，液氮保存1，2年都没问题。

have-a-rest

两个没啥大区别，不过最好的是取胚做新鲜的MEFs，传代两次以内，MMC处理或IR处理后直接使用，这样效果最佳。 ...) |0 A- ?( a, u) s3 ^
ppcl2 发表于 2010-4-4 03:21

# o) y, e" a, t" z& C: B& E- [& X: Z: i+ W

, k, O: ]+ \5 w; F: I; ^3 Z    就按这个做！

nhzxcsc

一般都是按照MEF先灭活后种植这样的顺序做的。

starlight

都可以的，我们的做法是先大量冻存未处理的原代mef，用的时候复苏出来再传代，处理；先传代处理，冻存，由于丝裂霉素处理过，细胞状态可能有影响，冻存要做好

cortex

都也可以，只不过先种植，后灭活。需要充分洗涤，尽量将MMC洗干净。

jiejesse

正是所求