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小鼠胚胎干细胞培养时MEF灭活程序?   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-3-31 02:37 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有用MEF来养小鼠胚胎干细胞的么?大家是:MEF冻存--复苏--把MEF种植在明胶包被的培养瓶——灭活——种植干细胞,  还是:MEF灭活-冻存--复苏种植在明胶包被的培养瓶--种植干细胞     知道的说一下 不甚感激
, f! z; ~& a- x6 u% E/ A问题意思是:MEF先灭活后种植在包被明胶培养瓶还是MEF先种植后灭活?
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金话筒 优秀会员

沙发
发表于 2010-3-31 08:14 |只看该作者
这个 方法差不多 ,还可以
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藤椅
发表于 2010-3-31 12:19 |只看该作者
学习一下

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板凳
发表于 2010-4-4 02:12 |只看该作者
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有时候我MEF多了,就是MMC处理完冻存,短期内可以解冻铺板再用。不一定一切按操作规程的。
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报纸
发表于 2010-4-4 03:21 |只看该作者
两个没啥大区别,不过最好的是取胚做新鲜的MEFs,传代两次以内,MMC处理或IR处理后直接使用,这样效果最佳。不过建立新的干细胞系最好这样,对于传代培养已建系干细胞,则没有必要,冻舒feeder就可以了,液氮保存1,2年都没问题。
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地板
发表于 2010-4-4 10:47 |只看该作者
两个没啥大区别,不过最好的是取胚做新鲜的MEFs,传代两次以内,MMC处理或IR处理后直接使用,这样效果最佳。 ...7 c- ~. n% H4 T+ W* l
ppcl2 发表于 2010-4-4 03:21
% |+ S$ d, F1 k% D( n

- p, d. m, Z* [: H2 ?+ r5 p9 N: a1 N# C; k5 C  ^3 ?
    就按这个做!

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发表于 2010-4-4 13:01 |只看该作者
一般都是按照MEF先灭活后种植这样的顺序做的。
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发表于 2010-4-6 00:27 |只看该作者
都可以的,我们的做法是先大量冻存未处理的原代mef,用的时候复苏出来再传代,处理;先传代处理,冻存,由于丝裂霉素处理过,细胞状态可能有影响,冻存要做好
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发表于 2010-4-6 13:07 |只看该作者
都也可以,只不过先种植,后灭活。需要充分洗涤,尽量将MMC洗干净。
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发表于 2010-4-6 22:16 |只看该作者
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