小鼠胚胎干细胞培养时MEF灭活程序？

czzhaozhu

我比较过两种方法，得出的经验是MEF原代冻存，复苏后经丝裂霉素灭活再种植效果更好！

sniper

灭活* u  _# D3 N2 E9 d! i- T
       
6 E) v) X1 |# R! u; q  L1 v（1）        放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个内装200 ml自来水的血清瓶，插入一根温度计，温度监控以此为准）；
7 D3 I1 r- E/ C（2）        当温度计显示56℃时，控制在此温度30分钟±3分钟；若不小心使温度上升超过56℃，则：若仍未超过60℃，且时间很短（比如：不超过5分钟），则仍可使用；若超过60℃，或者时间较长，则弃去不用
! D+ E- e2 l! S0 X0 g: X5 j1 Q# l（3）        取出，自然冷却至室温（约需1－3小时），可分装或－20℃继续冻存；

polato

& t6 P% @3 w9 X, Q- j7 F: ^3 j6 M/ o, |# |* W
直接买灭活的MEF就可以了
6 M) P/ K0 K1 w! ^: a赶上促销的时候，100快就可以买上一支10^6规格的

polato

相比于射线灭火的和经过丝裂霉素灭活的具有以下三大优点：
% A/ L" _2 v$ a5 k" j$ Y; g, S/ rγ-radiation 处理，完全灭活，不含有毒成分，环保健康。目前用于制作MEF的丝裂霉素-C有以下缺点：A、长期接触丝裂霉素-C，药物毒性将严重影响操作人员的身体健康；B、丝裂霉素-C溶液的不稳定，在冷冻保存的条件下，也会快速降解，导致处理的细胞不能完全失活，严重影响后面实验分析；C、丝裂霉素-C的残留，将严重影响ES细胞的状态，痕量的丝裂霉素-C也会导致ES细胞增殖抑制和分化。而γ射线照射处理的MEF细胞将不存在此类问题。

tangxiao

下载学习了，谢谢！
7 B0 B7 m9 M: j2 R请问用哪家的mmc，划算些哦？Sigma ，太贵了!!!

上海过客

这个 就买 海正的 丝裂霉素吧 ，非常便宜 。

zhbshi998

我们做的是直接取小鼠胚胎成纤维细胞原代培养，12.5d的可以戴细胞铺满后直接用原代，丝裂霉素C处理后，就可以做饲养层了，13.5-14.5d的一般传代3-5代使用。