【求助】肿瘤干细胞球培养细节

rachelcy

现在正在做肿瘤干细胞球培养，有几个问题求教大虾们：$ H2 f" k+ q, t0 R/ i' W1 Z
1、无血清培养液，文献中一般有b-FGF和EGF,加B27和LIF有什么意义，必须加吗# C' e6 {5 C$ `+ k: y( @
2、一般成球的时间是多久，文献说4-7天，想问问有没有做过的，传授点经验
0 c5 m, M$ u* a/ I+ D7 ?! O3、成球的悬浮细胞，怎么换液，怎么与死细胞分开
$ d0 ?$ I$ Q; \+ G+ |+ D4、最后收集细胞球，做免疫荧光或者western-blot，怎么把球消化成单个细胞，消化多少时间
  e; Z4 O. R& ^7 j2 Q; L7 T5、能给我说说的培养基配方和细胞密度

entmao

我也想知道。

sunyangyjs

哪位大侠做过此类实验，盼给予帮助

sunyangyjs

我只知道LIF激活的下游STAT3通路对干细胞renew有用，其他问题也很想知道答案

lab114

太多类似的文章了，自己看

super0110

我也想知道。

wjl2003

b-FGF和EGF这两个生长因子是必须的。

along0312

可以通过低速离心，去除培养基及死细胞。用accutase将干细胞球消化为单细胞。

sunnyhuimin

回答你第三个问题，是前天学术交流时一个国外的专家教的:& ~  f5 t3 J( Z
1在换液时，只需倒去四分之三，过程中不要摇晃，在瓶底留0.2~0.3cmmedium，然后加入新培养基就可以了。+ K9 A5 t. ~/ ]* I7 U- `
2去除的旧medium在离心后，倒去medium，将底部的细胞重悬后回收，可减少细胞损失。- p. q9 R, w3 q8 }! O
3细胞长至70%~80%就传代，不要等到100%，消化时用Tryple,损伤小效果比胰酶更好，1ml,消化8~10min.
: n: k% W# F. l0 a$ F( g希望能帮到你~

lsp_318

多谢了。。。。实用的方法，能有其他更详细的内容就好了