【求助】肿瘤干细胞球培养细节 - 肿瘤干细胞专区干细胞之家



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查看: 42041\|回复: 10	go 【求助】肿瘤干细胞球培养细节 [复制链接]

rachelcy

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楼主

发表于 2010-4-11 16:56 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

现在正在做肿瘤干细胞球培养，有几个问题求教大虾们：
1、无血清培养液，文献中一般有b-FGF和EGF,加B27和LIF有什么意义，必须加吗7 K/ @: k" B0 E7 Y
2、一般成球的时间是多久，文献说4-7天，想问问有没有做过的，传授点经验
3、成球的悬浮细胞，怎么换液，怎么与死细胞分开
4、最后收集细胞球，做免疫荧光或者western-blot，怎么把球消化成单个细胞，消化多少时间
5、能给我说说的培养基配方和细胞密度

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entmao

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沙发

发表于 2010-4-21 21:23 |只看该作者

我也想知道。

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sunyangyjs

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藤椅

发表于 2010-4-23 16:48 |只看该作者

哪位大侠做过此类实验，盼给予帮助

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sunyangyjs

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板凳

发表于 2010-4-23 16:49 |只看该作者

我只知道LIF激活的下游STAT3通路对干细胞renew有用，其他问题也很想知道答案

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lab114

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报纸

发表于 2010-4-26 15:09 |只看该作者

太多类似的文章了，自己看

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super0110

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地板

发表于 2010-6-18 18:06 |只看该作者

我也想知道。

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wjl2003

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7楼

发表于 2010-6-19 21:26 |只看该作者

b-FGF和EGF这两个生长因子是必须的。

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along0312

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8楼

发表于 2010-8-12 12:10 |只看该作者

可以通过低速离心，去除培养基及死细胞。用accutase将干细胞球消化为单细胞。

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sunnyhuimin

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9楼

发表于 2010-9-1 22:17 |只看该作者

回答你第三个问题，是前天学术交流时一个国外的专家教的:# d1 ~, w1 _9 C8 A# c, I3 r
1在换液时，只需倒去四分之三，过程中不要摇晃，在瓶底留0.2~0.3cmmedium，然后加入新培养基就可以了。
2去除的旧medium在离心后，倒去medium，将底部的细胞重悬后回收，可减少细胞损失。
3细胞长至70%~80%就传代，不要等到100%，消化时用Tryple,损伤小效果比胰酶更好，1ml,消化8~10min.
希望能帮到你~