脐带间充质干细胞的具体培养步骤

xuehu20

有见地

zhangyujunwei

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很好的办法

taoqilh

回复 烂桃 的帖子7 @$ a/ z: @5 f4 o
* S. z4 U$ v; ?4 y7 M! p1 _" R
我也是做猪的脐带间充质干细胞，我做的过程中只有三根管，没有出现四根的，在培养过程中遇到了和你一样的问题。我尝试了消化后的细胞培养，由于先贴壁的以杂细胞比较多，所以在三天后把培养瓶里的培养液转移到另一个瓶子里，转移后贴壁的细胞相对而言纯一点，传代后基本看不到什么杂细胞8 L' i  C3 i+ A' k2 L

taoqilh

回复 烂桃 的帖子
5 o9 ?" C" A( Q) j% |3 u5 y( ^$ O* s
你好，能加你为好友吗，我也是做猪的脐带间充质干细胞的，能和你请教一些问题，分享的点文献吗，关于猪的脐带间充质的文章还是比较少，借鉴的东西也少，和你请教一下。我是新手，没有加你为好友的权限，能加我为好友吗，谢谢

Learner

我前面两种方法都试过了，但是都不太成功。第一次，我用酶消化法因为样品取来较晚，用的是四型胶原酶过夜消化，第二天早上想离心发现消化后的样品太粘稠了，即使离心也有很多细胞在上清液中。我就直接将上清和下面的组织块分别种在培养皿中。三天后发现细胞大量死亡，我还以为是污染了，其实不是。我将它们全部换液，看见皿底有少量细胞贴壁，星星点点。换几次液后细胞都活下来了。但是很少，长的也不快，看来要很久才能长满。
7 B- [. p: O* l0 P; K8 y第二次，我用了消化法和直接贴壁法两种。消化法没有过夜，按照一个文献中讲到用0.1%胶原酶消化一小时，再用0.25%胰酶消化半小时离心。这次有了上次的经验，我用体积远远大于消化液的PBS稀释后离心。种到培养皿中结果第二天细胞大部分都死了。是不是过度消化了？
3 p  E( }0 [  z: H直接贴壁法：我剔除血管后，将组织剪碎然后再将剪碎后的组织贴于培养皿底部，中间没有留出间隔。在超净台中放置15分钟使组织贴壁后缓慢加培养基。第二天观察组织周围有一些圆形未贴壁的细胞。三天后换液，还是不见贴壁细胞，那些圆形细胞很小也不知是死是活。看起来也不乐观。可能是我性急，总想看，即使不看，在细胞爬出来之前用不用换液？希望做成功的前辈不啬赐教！

Learner

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! b, a/ t. K) f$ i1 ^3 W8 Z& y
! M3 o& D- R# F/ }1 B# J3 h' I5 s9 p有文献说：脐带wharton Jelly中主要是透明质酸。

Learner

两篇文献关于脐带间充质干细胞的分离方法和大家分享一下！