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本帖最后由 细胞海洋 于 2010-4-15 06:54 编辑
: Z4 ^" w4 t. s8 [0 w$ f( X2 a3 M
最近写文章，标书，做实验，忙的不可开交，但是这些所有的事情都需要相关文献的支持才能解决，但是看文献是很痛苦的事情，一时之间很难了解全面，所以就想能不能有一个平台专门给人讲解文献，就向现在我们很多实验室正在开展的文献介绍会一样，专门介绍一些最新的文献和相关领域的进展文献。 k3 J: @9 r/ T6 E! G
所以就想干细胞之家能不能在这个方面有一些突破，鼓励会员以更加清楚方式的讲解文献。如果每人安以下方式提供一篇文献，就会大大提供我们的文献量和知识量，当然只是鼓励，不要求必须这样。
6 \4 |/ M/ b6 x7 s- M, e* z/ L- L/ ?9 ?3 F' p* \' Q( a( \
我正在跟版主商量看看这样是否可行，希望大家有什么意见尽量回复，这样的话说不定我们可以创造出这样一个平台，希望大家觉得可以的多多支持啊，多多留言，多多出主意。助人者自助。
4 X2 B9 I- i# C. Q( T% d1 v. v. ^) b2 F
模板为：
' v4 w& L6 o; C( c; n
9 K- ]- U n- x 标题
0 f9 _7 ^- V4 u7 B$ _& T* x0 O2 Y 1 相关研究的背景
" }8 e/ F! B2 W9 l( m 2 这篇文章的研究目的. t3 A' p( n8 d" T) h, Z# X8 ?/ L7 t
3 技术路线
7 w( U+ J- q! |' L& m 4 结论 （包括新颖的结论和文章结论）6 ^. z* e* \- Z2 o
5 读文章的收获或者其他的补充9 A+ _, \5 _8 {) R! }8 j
6 提供原文 7 Y4 c, M5 v4 T8 u- b& X# D o
4 h" R0 A9 y: R6 b ^1 h下面是我找的2010，3月21日发表的一片文章，作为列子，) W# z. b4 ?( j" S3 m7 A
Expression of Pdx1 mediates differentiation from mesenchymal stem cells into insulin-producing cells.( ?. e/ B1 n8 W9 c* V
! s- S: \' ^& {: e% ~ Mol Biol Rep. 2010 Mar 21. * ~" K- M# N2 \. T+ K
4 m) o/ F: ?# v9 C' J4 D8 U2 [
1 相关背景:目前对于MSCS的体外诱导分化为胰岛素分泌细胞不论国际还是国内主要利用两种方法，一种是在体外利用小分子化合物或者损伤胰腺的蛋白匀浆来诱导MSCS分化成胰岛素分泌细胞，另一种是利用分子生物学的方法构建pdx-1真核表达质粒来转染MSCS后使其向胰岛素分泌细胞分化。3 s% K0 z- O/ ~ S1 t! _
2 这篇文章的目的：这篇文章主要有两个目的，一个是想证实一下pdx-1的真核表达质粒是否能诱导大鼠的MSCS分化成胰岛素分泌细胞，第二是为了pdx-1真核表达质粒激活其它胰岛素基因表达的分子机制。
A& E& w' _6 \. ] 3 这篇文章的技术路线：: d* B0 H8 G( I# w5 c
(1)MSCS的培养和鉴定
; g' d& K7 L% n (2)重组真核表达质粒pEGFP-Pdx1 and pcDNA-Pdx1的构建 - C7 I" C% a, ?
(3)利用构建的真核表达质粒转染MSCS 5 h% n& ?" J# Z, M* d# A1 L. m" o
(4)利用RT-PCR检测转染后的MSCS细胞中是否表达pdx-1基因 - |3 E/ }! q% k3 s% }+ c
(5)利用westernblot 检测转染后的MSCS细胞中是否表达pdx-1蛋白
+ d; Z/ i0 ^( j) J (6)体外利用培养基诱导其分化 （3天低糖，9天高糖）* }0 m g& H! V* @* ^0 }# {) J7 l
(7)诱导12天后利用DTZ染色鉴定MSCS是否分化成了胰岛素分泌细胞 （形态学鉴定）
3 t8 I& N9 j4 i& i% L+ D/ u (8)利用化学免疫荧光方法检测胰岛素的分泌 （功能学鉴定）" v5 u' q( i6 k+ ~" Z
(9)利用RT-PCR和半定量real-time pcr 鉴定是否有正常胰岛细胞相关基因的表达及其量 （分子生物学鉴定）9 P8 a( e, }# @6 e7 t U' a
（10）利用westernblot 检测是否有正常胰岛细胞相关蛋白的表达
( d7 |* S3 g- ? 4 这篇文章的新颖之处：作者讨论提出，在低糖的条件下，pdx-1定位于MSCS的原子核周围，于共轭抑制物相互作用，阻止MSCS向胰岛素分泌细胞分化。而在高糖培养基条件下pdx-1富集到MSCS的核原浆，与共轭激活物相互作用，激活其下游基因如：Ngn3等，并与其启动子结合，促进其表达，从而使MSCS向胰岛细胞分化。/ d' J# }- ?3 d
5 n/ v- G" T8 N) G: B% E
5 收获：通过这篇文章我们在体外研究干细胞向胰岛细胞分化治疗糖尿病时，应该注意不同的葡萄糖浓度下，对其诱导的速度和效率上都将存在影响。0 ]5 U* ^ t4 M7 \# Z [. [
/ u! C2 Q6 f7 e0 i4 Z 6 提供原文 |
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发表于 2010-4-14 23:55
发表于 2010-4-15 08:09
