求助 核型分析

wjy2003123

求助有没有谁做过成纤维细胞的核型分析  我本人做mES的核型分析很容易出的  但是做体细胞的就是出不了结果   有做过猪的成纤维细胞核型分析的更好

iseeyou1210

一般的做fibroblast的metaphase的方法很多。
$ z/ I* h  S: L  f% A# J我是第一天传代，第二天细胞应该有40%-50% confluence，第三天早上的时候，加上50ng/ml的colecemid，incubate上1-2个小时，然后收集细胞，用0.075M kcl低渗20min RT，3：1 Carnoy fixation 预固定，300-500g离心5min，去上清，用3：1 Carnoy fixation洗2次，最后suspend在适当体积的fixative里面。

iseeyou1210

我觉得细胞要是生长比较旺盛的话，一般一个小时就可以5 i1 A# K: j6 n/ N' w1 I) D" [- U
可以延长，不过分裂相会比较短。
2 [. G0 b( U0 P7 ~/ J- i如果仅仅是count number的话，可以。) r9 `8 ]) _+ G: D8 ?
要是看一些带型分析，就不好了。

wjy2003123

我是秋水仙素处理3个小时  然后低渗半个小时    然后固定20分钟 离心 重复2次 结果是细胞没有摔开

friendly0722

不知道你遇到什么问题，做动物和人的区别根据自己的经验就是先做生长曲线，在对数生长期时处理，并且低渗的时间稍微长一些。不知道能不能帮到你

koilai

回复 4# iseeyou1210
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2 U$ q; t4 }: Q
( I4 O1 _5 H3 B8 ]" ?. n) C    同意

YYQ6301

最近也在做这方面的实验 ，明天看片，希望能有个好结果