求助 核型分析

wjy2003123

求助有没有谁做过成纤维细胞的核型分析  我本人做mES的核型分析很容易出的  但是做体细胞的就是出不了结果   有做过猪的成纤维细胞核型分析的更好

iseeyou1210

一般的做fibroblast的metaphase的方法很多。
0 l+ |) ^+ u, j- G. n我是第一天传代，第二天细胞应该有40%-50% confluence，第三天早上的时候，加上50ng/ml的colecemid，incubate上1-2个小时，然后收集细胞，用0.075M kcl低渗20min RT，3：1 Carnoy fixation 预固定，300-500g离心5min，去上清，用3：1 Carnoy fixation洗2次，最后suspend在适当体积的fixative里面。

iseeyou1210

我觉得细胞要是生长比较旺盛的话，一般一个小时就可以- }3 p; Z7 F- q
可以延长，不过分裂相会比较短。' ?9 U; P. d9 a! r
如果仅仅是count number的话，可以。
% i! D2 d9 _: ^  b要是看一些带型分析，就不好了。

wjy2003123

我是秋水仙素处理3个小时  然后低渗半个小时    然后固定20分钟 离心 重复2次 结果是细胞没有摔开

friendly0722

不知道你遇到什么问题，做动物和人的区别根据自己的经验就是先做生长曲线，在对数生长期时处理，并且低渗的时间稍微长一些。不知道能不能帮到你

koilai

回复 4# iseeyou1210
& O+ a# ~: ^8 F7 z' _' X% j4 |4 q4 l4 a8 i. T
5 P1 |  q4 H- `+ \4 M" e* ?
    同意

YYQ6301

最近也在做这方面的实验 ，明天看片，希望能有个好结果