片段总连不上

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个人认为应该从以下几个方面考虑: |  F7 x; I4 \, b& G
1.先重新看一下实验设计，确保酶切位点是一致的，且是单酶切位点  K8 {; c9 Q2 o+ h" @' n
2.观察以下BUFFER，双酶切的BUFFER是与两种酶单用的BUFFER不同的
+ {' G8 R5 m& @: B; W3.调整链接体系和反应条件，尝试在体系中提高片段含量。此外，试试更改T4连接条件，听说有16°过夜的，也有4°的反应条件（我只用过16的）。改变以下试试. s( _2 l. Y  d3 f4 }7 e1 v
4.实在不行尝试分步单酶切
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9 X4 @" I) f. m% G我能想到的大概这些吧。。