片段总连不上

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个人认为应该从以下几个方面考虑" ^& M! n# n8 X6 c; M8 L
1.先重新看一下实验设计，确保酶切位点是一致的，且是单酶切位点
6 O( ?' o  W$ K2.观察以下BUFFER，双酶切的BUFFER是与两种酶单用的BUFFER不同的
3 q+ X2 i4 K; q3.调整链接体系和反应条件，尝试在体系中提高片段含量。此外，试试更改T4连接条件，听说有16°过夜的，也有4°的反应条件（我只用过16的）。改变以下试试
8 A* _' F0 O7 d$ y$ R+ [4.实在不行尝试分步单酶切
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7 L1 y" b8 C  J* d. f2 ?我能想到的大概这些吧。。