小鼠饲养层细胞的鉴别？

wangzhuo822001

用小鼠胚胎成纤维细胞来支持胚胎干细胞，如果鉴别培养的成纤维细胞是否是纯化的啊？

excellbio

那如果买 REPROCELL 公司的这个MEF 和SL10 不可以吗

yuangaoqian

我想问一下cony   红细胞不是不贴壁吗   为什么培养过程中还有红细胞污染呢

leestone

一般取得MEF之後，仍然需要在DMEM＋10％FCS的medium中繼個4~5代(P4~P5)1 E7 E0 T" ^" S3 w+ b  y  w5 W
在繼代的過程中
2 ?) f1 u/ ^( y0 t- d經由medium及trypsin的篩選  L. I7 d5 x! q" o$ B: @
此時的MEF已經具有相當的純度可以做為飼養層細胞使用
, T$ b2 |% F+ t7 t% a( U6 H7 H4 r至於使用P0的MEF要用來做iPS的話，6 I+ ~$ Y; V4 l7 x
的確會有多能性細胞污染的小風險. n3 t' M5 ]/ k0 }
不過如果Control做好應該還是可以用來做實驗的
6 e2 I+ k( x1 R0 @另外樓上說得污染鑑定的確蠻重要的
! i" M0 ?9 b- L- D尤其是黴漿菌(microplasma）的問題$ a) I/ R/ p  p+ Z% D7 E$ Z, i2 F' S
因為無法在顯微鏡底下觀察到，必須跑PCR才有辦法確認
& @7 ]  i, i) T3 ]" ^; a3 l+ @如果用到有microplasma contamination的MEF養胚幹細胞
4 r; v0 W4 p1 Q& V  M: H. R對於實驗可是相當大的影響喔

zsc78

可能关键在于胚胎是12.5天到13.5天，只要是这个时间段的胚胎，按照MEF的分离方法分离出来的细胞绝大部分都是成纤维细胞，不需要鉴定，其它的就是形态观察，好像没有必要进行特别的鉴定。其实更重要的是需要进行污染鉴定。

bjchen789

学习一下

treestem

做MEF做不到太纯，也不需要完全单一的成纤维细胞。
, t7 C' O5 E# |/ M4 n我们通常所说的成纤维细胞（fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。根据不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞乃是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动；纤维细胞（fibrocyte）功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核小着色深，核仁不明显，细胞质少。此二型细胞可互相转化。

cony

原代的时候你会发现很多红细胞，但是消化传代一次以后就没了。

zzp40

我做的时候没有鉴定过，不过当时是等细胞贴壁后看细胞形态，成纤维细胞梭行

mominglily

小鼠成纤维细胞可以释放诸多因子，如：Ⅰ型胶原，它可以作为该类细胞的标记物。, ?1 V% _0 D- @, Q+ C" h
你可以做一下胶原合成实验，这可以验证你从完整胚胎或组织中得到的是否确实是小鼠成纤维细胞。