求教有关大鼠BMSC原代分离方法选择

illidancui

小弟刚开始接触大鼠BMSC，由于没有师兄师姐带，所以只得自己试着做。
2 i# J( f! U6 O$ W" c/ p一般用的分离法有离心和全骨髓法，求教一下具体选择哪个好点，因为我好像在哪里看到有人说过要是做细胞用于MARK研究的用离心比较好，要是做诱导的全骨髓发就行了。
& R" z$ ]# w' h4 M4 v( C' F小弟要转基因来诱导分化的（做过一次全骨髓的，比较失败），还望高手指点一二。

illidancui

回复 2# bingo
5 {  q( x, g8 R& M. T& x* v1 `0 |/ Q
- `) P* F2 n! I9 E9 R3 o
    2楼师姐，你是我偶像，你这也太犀利了吧。呵呵。确实感觉percoll离心有点麻烦，下次都做一下对比下看看再听听大家的意见取舍一下。

illidancui

回复 4# 碧海蓝天 1 r5 p8 _7 X3 @6 p5 o
- G, K/ n1 ~$ p9 J3 H: u# {

  l5 f! e; f9 {# E% [    个人感觉可能24h第一次换液PBS吹细胞了，掉了很多，密度变得好低。后来细胞奇怪地就成团了，聚在一起，而且感觉长的奇丑无比。

mahong_ok

还是全骨髓法好，数量多，细胞质量好，只是血细胞多，不过换几回液或传一下代就没了。

xxzhang83

我就用全骨髓，细胞传到第2代就比较纯了，长得很快。  f* T2 u0 j: \/ c
我用来诱导成骨，分化也可以啊~~~

碧海蓝天

我们用的全骨髓贴壁法，分离简单，细胞增殖快，生长状态好，传代后纯度也可以，你可以试试，至于你说的全骨髓失败是什么意思，怎么会失败呢

科学家

回复 1# illidancui
6 p; V/ b. j# Q6 U% ]
" n+ _  Y) ~# Y$ y- H  [1 \  s& o
    全骨髓培养细胞数量比较多，受到的损伤也比较少，分化效果比较好，离心对细胞有损害而且也比较麻烦

bingo

重大的师弟？呵呵~感觉像~
/ @' O- Y4 R+ l其实就像我跟你说啦，percoll法分离的细胞较纯。全骨髓长的较快。不过最近我们的白膜层不是很明显，不晓得是不是离心机的原因~