求教有关大鼠BMSC原代分离方法选择

illidancui

小弟刚开始接触大鼠BMSC，由于没有师兄师姐带，所以只得自己试着做。7 z* E' M, u+ r7 q* C
一般用的分离法有离心和全骨髓法，求教一下具体选择哪个好点，因为我好像在哪里看到有人说过要是做细胞用于MARK研究的用离心比较好，要是做诱导的全骨髓发就行了。
, s5 ^# Z6 T+ d, o& f8 S' N4 u* ~小弟要转基因来诱导分化的（做过一次全骨髓的，比较失败），还望高手指点一二。

bingo

重大的师弟？呵呵~感觉像~
+ K2 o# a4 l" e* {8 z# x其实就像我跟你说啦，percoll法分离的细胞较纯。全骨髓长的较快。不过最近我们的白膜层不是很明显，不晓得是不是离心机的原因~

科学家

回复 1# illidancui
) U0 C! @8 d# z3 \, n7 f1 t8 s/ @7 o* N' a
. [) q6 n- y2 T) a" T  Q
    全骨髓培养细胞数量比较多，受到的损伤也比较少，分化效果比较好，离心对细胞有损害而且也比较麻烦

碧海蓝天

我们用的全骨髓贴壁法，分离简单，细胞增殖快，生长状态好，传代后纯度也可以，你可以试试，至于你说的全骨髓失败是什么意思，怎么会失败呢

xxzhang83

我就用全骨髓，细胞传到第2代就比较纯了，长得很快。
) v! E0 K( K5 e0 A* J0 D5 k# e我用来诱导成骨，分化也可以啊~~~

mahong_ok

还是全骨髓法好，数量多，细胞质量好，只是血细胞多，不过换几回液或传一下代就没了。

illidancui

回复 4# 碧海蓝天
6 x% y* |: v& P- R+ M1 X) @2 H4 Q; b; r- u& B4 s1 q

# b. o$ f: i% k- E! p+ V    个人感觉可能24h第一次换液PBS吹细胞了，掉了很多，密度变得好低。后来细胞奇怪地就成团了，聚在一起，而且感觉长的奇丑无比。

illidancui

回复 2# bingo
9 x: R1 s6 a5 W. X
5 s$ R/ ^9 x. y# W9 i' M4 i# f; i" F( D7 {3 R$ ?8 t( Q
    2楼师姐，你是我偶像，你这也太犀利了吧。呵呵。确实感觉percoll离心有点麻烦，下次都做一下对比下看看再听听大家的意见取舍一下。