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PCR实验里最怕出现什么问题?当然是辛苦做出来的结果假阳性了。7 L# z/ m5 k& C( J' ^
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当PCR出现假阳性的时候,我们常常会考虑是不是引物/Mix/*等等污染模板,然后一一排查,劳心劳累费时费力,有时还是找不到原因,简直要崩溃。* X0 F- ?3 O2 v! i
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这里我觉得要延伸思考一下,这些试剂仪器到底为什么会被污染了呢?其实是核酸气溶胶污染。 2 {- N+ h( c9 q! b1 i
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3 g3 Q+ P& \. V, [1 k! ~+ q$ w离心机离心/剧烈地摇动反应管/PCR开盖/吸样时及移液器的反复吸样等等,会产生空气与液体表面摩擦的,都会产生核酸气溶胶,也就是实验室里(或移液枪内)弥漫着含有长短不一核酸片段的小水珠或小颗粒,这些小颗粒沉降(打到)到空白样中导致最后扩增出了条带。
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可想而知,这些核酸小液滴还会落到实验台面/PCR仪/移液枪/*头*盒子等等地方,如果我们不注意,这些核酸小液滴就会日积月累地积聚,这样做实验就特别出现问题比如PCR假阳性。
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那么我们平常做实验或者实验室管理上核酸气溶胶(也就是核酸小液滴)产生了巨大的污染究竟该怎么办呢?" P$ c( D6 l& C) s% M( `
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大面积核酸污染清除操作方法:0 ]* Q# k, e& j7 \- V
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* K- R& @- E. ~% D% A8 O" L3 l(1)对污染区域使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行大面积处理,包括:地板、墙面、天花板、门、窗户等地方,同时加大通风量(内循环无用,尽可能外循环);
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- `1 o! e" f( B) S( r. b(2)对污染区域内的设备使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行反复处理;对超净台等含有空气过滤系统的设备,请更换过滤网;对移液器等污染设备采用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行清洗,高温灭菌;
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(3)待污染区域及设备器件清理完成后,使用紫外灯辐照4小时以上;) N' C1 l. N+ X/ ^: W- D
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(4)可请保洁员按照上述要求(1)(2)(3)连续清理三天;0 o* C" u* Q# E7 H
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(5)设计实验对照组(根据污染源基因片段),进行阴阳对照实验,根据阴性对照确认污染情况,可采用8连排PCR管(2个阳参+6个阴参);若阳参起跳,阴参起跳,则污染需要继续清理;若阳参起跳,阴参全部不起跳了,则说明污染等到控制,可恢复正常实验;
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核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)一盒500 mL;10平米的房间需要2盒可完成覆盖;其他设备及器件根据情况进行采购;# `& G; g# W, W% z
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大面积核酸气溶胶污染非常难以清除,若不立即采取清理,污染会更加牢固,长期释放污染核酸,导致实验室停工。 |
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