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[讨论] 实验室的日常清理,做一名合格的扫地僧 [复制链接]

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楼主
发表于 2019-2-14 17:43 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
PCR实验里最怕出现什么问题?当然是辛苦做出来的结果假阳性了。; P' D3 [9 e9 g  {) b
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当PCR出现假阳性的时候,我们常常会考虑是不是引物/Mix/*等等污染模板,然后一一排查,劳心劳累费时费力,有时还是找不到原因,简直要崩溃。9 P3 J6 e6 S) Z( \0 K5 l
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这里我觉得要延伸思考一下,这些试剂仪器到底为什么会被污染了呢?其实是核酸气溶胶污染。
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离心机离心/剧烈地摇动反应管/PCR开盖/吸样时及移液器的反复吸样等等,会产生空气与液体表面摩擦的,都会产生核酸气溶胶,也就是实验室里(或移液枪内)弥漫着含有长短不一核酸片段的小水珠或小颗粒,这些小颗粒沉降(打到)到空白样中导致最后扩增出了条带。
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* Z1 Z; w3 ]7 `$ J( V! l1 |5 ~可想而知,这些核酸小液滴还会落到实验台面/PCR仪/移液枪/*头*盒子等等地方,如果我们不注意,这些核酸小液滴就会日积月累地积聚,这样做实验就特别出现问题比如PCR假阳性。" K) Y5 x7 E* H* j) \

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那么我们平常做实验或者实验室管理上核酸气溶胶(也就是核酸小液滴)产生了巨大的污染究竟该怎么办呢?
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$ i; [! R% k9 R6 a3 s* d1 t大面积核酸污染清除操作方法:
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(1)对污染区域使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行大面积处理,包括:地板、墙面、天花板、门、窗户等地方,同时加大通风量(内循环无用,尽可能外循环);( G/ k1 k: [, {8 H( I

: q. \0 h  F2 l9 b5 @' \(2)对污染区域内的设备使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行反复处理;对超净台等含有空气过滤系统的设备,请更换过滤网;对移液器等污染设备采用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行清洗,高温灭菌;
) K& {7 a4 u: E) H. c4 s/ ~+ G) o0 T
# P# [# s( r, l$ X% o( w5 T9 h3 M(3)待污染区域及设备器件清理完成后,使用紫外灯辐照4小时以上;2 J% U% U5 j; l6 O" ~: E6 [

6 k7 q  k! Q1 d1 X3 B% @6 s$ h(4)可请保洁员按照上述要求(1)(2)(3)连续清理三天;
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(5)设计实验对照组(根据污染源基因片段),进行阴阳对照实验,根据阴性对照确认污染情况,可采用8连排PCR管(2个阳参+6个阴参);若阳参起跳,阴参起跳,则污染需要继续清理;若阳参起跳,阴参全部不起跳了,则说明污染等到控制,可恢复正常实验;
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' K4 X. f" }) Y( {$ t6 K核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)一盒500 mL;10平米的房间需要2盒可完成覆盖;其他设备及器件根据情况进行采购;# n1 m; {8 v. n- Q  d5 ~
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大面积核酸气溶胶污染非常难以清除,若不立即采取清理,污染会更加牢固,长期释放污染核酸,导致实验室停工。
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