一次失败的脐带组织贴壁法尝试

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本人近日进行了一次脐带组织贴壁法之后，发现除了受污染外，培养箱都有一种腐烂的臭味，请问大家哪位有人经历过这样的事情，该如何解决？感谢！

wshzhoum

回复 13# realinter 9 C; x6 y  D$ }3 ^! N" `7 E* I

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9 P& y2 t2 D9 @  c    谢谢斑竹。再去收集标本，重新取取看，希望能成功！

wshzhoum

回复 12# hawkyiger 6 i; Q2 e6 t& _' u% F$ f0 z" u1 L, n0 a
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    谢谢。如果不用胶原酶，用胰酶可不可以~

hawkyiger

回复 11# xiegm 4 {3 h) p* s1 _0 C4 a$ \' Q

8 H$ N6 l6 T. v) r8 h要想完全均匀铺平是不太现实的。华通胶既然是一种富含粘液的结缔组织，那么剪碎的组织块会聚集在一起。你可以用一个无菌的刮刀或其他东西慢慢的分一下，还是那句话：你不用指望所有的组织块都均匀大小，均匀铺开，只要有一部分较小的不连在一起的组织块铺开就可以了。小心处理，只要有一些组织块能够分理出细胞克隆就算成功了。

realinter

回复 10# wshzhoum . I# L3 ?9 K" Z1 A7 W- Z: [
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可以把胶体收集到50ML离心管中，用长柄剪刀剪碎，大概2cm左右吧，再拿去贴壁，培养基可以比平时少加一些，容易贴壁点。前几天也不要老拿去看，等它贴好了再拿去观察。还有脐带最好是抛腹产的，这样污染少。

hawkyiger

回复 10# wshzhoum
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感觉必要的话先用胶原酶消化一下，然后在离心取组织块铺平

xiegm

回复 10# wshzhoum
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( [. O( R5 q0 j. E    均匀铺平确实是个问题，我也遇到了，希望高手hawkyiger支招，尤其是细节。

wshzhoum

回复 9# hawkyiger
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: B# s8 i5 k3 C/ L    咱脐带提取干细胞是从walton胶中提取，脐带表面倒没有特别油,但刨开后胶体就比较多了...本身胶体不就是应该黏糊糊的么?请问您是怎么铺瓶的或者对组织块有什么特殊的处理?我铺瓶时由于有胶体,不但贴壁很困难,而且组织块都挤在一起,无法均匀平铺.

hawkyiger

回复 7# wshzhoum
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+ j6 R+ @! B4 u0 Y& d这就属于脐带状态的问题了，因为你说的那种情况在制备脐带的时候就能看出来，会发现脐带一段一段呈油乎乎的状态，在前期把那些部分舍弃就可以。如果整根脐带都这样，那就可以不做嘛。

hawkyiger

回复 5# 5784630
1 ^' k. u4 V) x- X
9 D. y, x$ o5 ^其它的也没什么了，只是贴壁的时候要尽量剪得细一点，铺完后先不要着急加培养基，否则一加就会冲起来了，而且加的时候要尽量小心，控制一下加的力度。程序上就那样，但很多时候还是跟脐带有一定关系的，并不是每根都能得到好的结果