原代小鼠BMSC第5天了~~请教~

angel-sakura

, R1 v  a- R! Q! l

% h- s! p$ x; y+ V从分离代现在已经有5天了，细胞基本长满，如下图：* p" D  f( s; W7 @0 A- C; j
" u6 O5 v- I* r' D
10倍
+ t# `: W% Y. o1 T5 `' A8 c- e' J$ _0 X% V* q0 I3 L8 ~. a' ?3 i7 u3 m* `

6 ~5 i$ w0 I1 e+ k这个是20倍的
' C% r1 R) k; p0 i2 Y0 `* {+ u% y4 }0 k( m  L8 b

9 A& ~* Z, W2 n5 [我听有人说分离后放一周不去管它，但现在5天就长满了，是不是可以传了？还是得继续等？  R5 l1 Y* |; k' R) [
此外，我也已经传了~~但消化了5~6min，结果还有50%的细胞仍贴着。。我用的是0.25%的胰蛋白酶，无EDTA，是否消化时要加EDTA？消化时间大概是多少？  t2 u; B+ V$ Z. \  h8 W
再者，从20倍来看，细胞有一些是呈纺锤状的，其他的确是呈宽扁的圆形，请问可能是哪种杂细胞（消化时也是最先消化下来的）7 E4 T+ ^8 @  y& L" Y' z
谢谢~~~

xxzhang83

回复  xxzhang83 : O" z2 _/ m- B, S' M* D
内皮祖细胞？？有没有相关的照片？谢谢' ^& e, h* @5 I; `9 U; _
angel-sakura 发表于 2010-4-25 23:30

) f5 j3 a: U% S4 h) Z5 L8 t$ W
, Q' s; t" X- z. f" d没有，只是看上去像。网上搜一下，很多。

leaves1123

我的细胞也有同样的情况，也尝试过加EDTA，结果细胞状态很不好，后又改用0.5%胰酶消化5min ,细胞大多都能消化下来，但培养后状态还是不好，而分步多次消化的细胞生长就好些，那些贴壁太牢的细胞还是不要要的好，那些细胞不是MSC，或者是老化了，即使消化下来培养也会状态不佳。

xxzhang83

回复  xxzhang83 4 w. c8 |% Y5 w: k8 [8 f
内皮祖细胞？？有没有相关的照片？谢谢% d1 {/ P( f4 p9 h0 Y  F
angel-sakura 发表于 2010-4-25 23:30

& C0 }4 |, H/ i7 G, `
. `! {) z& k& f5 H没，只是看着像~~~

angel-sakura

回复 12# 开心果王
$ C. w- r; A; g# q4 }& N: ]今天刚试了下加EDTA的胰蛋白酶消化，消化时间为14min，但还是消化不下来..我胰蛋白酶浓度为0.25%，需要提高酶的浓度吗？

开心果王

需要加EDTA的，楼主可以对比一下咯，加了EDTA后应该效果会改善的。

angel-sakura

回复 10# 圣牛
' @- x3 Q" ]' f$ C' ?, J2 Q3 b但是现在的问题就是1min根本消化不下来啊~！

圣牛

从图片看，细胞培养的挺好的，应该可以传代了，时间久了易发生接触抑制。胰酶消化时间一般控制在一分钟左右就差不多了。

china1983chen

BMSC细胞不用消化这么长时间的，可以通过消化纯化一下细胞，超过一分钟 消化不下来的就不要了

duanduan48

MSC的消化时间是很短的，那些不能消化下来的可能是内皮细胞、单核巨噬细胞、脂肪细胞等。/ y, r  t7 f# X8 |8 S
不少文献中提到MSC传到10多代还是会有圆形细胞，即使通过CD11b negative selection 的方法培养，也还是会观察到圆形细胞。
* p: ^1 b* l0 F小鼠MSC有很明显的异质性，只要能通过诱导及表型鉴定符合一般的文献报道即可。