原代小鼠BMSC第5天了~~请教~

angel-sakura

+ a, O: O. i8 \! K# v

+ d% H) z1 }  M* A* O' F从分离代现在已经有5天了，细胞基本长满，如下图：
3 C+ W- `0 @$ {9 u9 d* ~" \9 V3 U$ J1 {7 \& Z
10倍# J& B( S3 h+ f" U. P

+ m9 [3 c2 C0 M1 v8 N# j1 }7 T9 _3 e; ~6 y$ @) t' G# h* z+ y( u: O
这个是20倍的
/ T! W) M4 L) ^0 ]# v* Q, j. T: d2 h
0 q% w- R( D6 g8 B9 y0 H; y9 f  z; q+ }( X& C
我听有人说分离后放一周不去管它，但现在5天就长满了，是不是可以传了？还是得继续等？
7 |& f5 O9 V- F3 ^此外，我也已经传了~~但消化了5~6min，结果还有50%的细胞仍贴着。。我用的是0.25%的胰蛋白酶，无EDTA，是否消化时要加EDTA？消化时间大概是多少？1 c% ^- l$ v3 O) N. Z, l
再者，从20倍来看，细胞有一些是呈纺锤状的，其他的确是呈宽扁的圆形，请问可能是哪种杂细胞（消化时也是最先消化下来的）
# @4 K4 l5 X. U; b谢谢~~~

xxzhang83

传代吧，BMSC细胞汇合70%到80%就可以传了。
; R9 t: n: V6 {2 R# l长满的话，细胞出现接触抑制，会停止分裂而容易分化。/ O3 P" D0 e) k0 K3 S  ^7 V, g
看上去有些像内皮祖细胞啊~~~~! d  m  v. `/ l5 o/ P
传代吧，第3代的时候再看一下，应该比现在纯度高~~~~

angel-sakura

回复 2# xxzhang83
' y$ E" W! {( }1 x% U8 m内皮祖细胞？？有没有相关的照片？谢谢

5784630

照图片看，你的细胞生长状况相当不错，我们一般说的一周不动，是在细胞状况一般的情况下的经验，但是如果发现细胞状态很好的话，尤其是你这样细胞已经达到一定的数目，细胞形态也相对正常的话，可以提前传代，因为细胞过密也会对干细胞的生长存在抑制作用。7 `- k2 I# Y- H3 B$ R. D6 ?
   另外，细胞过密也会对干细胞的分化潜能有不利影响。

zhaolili0324

我也觉得里面似乎内皮细胞不少

hamigua95

大鼠的MSC，最多消化1min。
! v7 v+ m1 h9 k! V/ V$ E( i! h9 c请问内皮祖细胞什么样子啊。可否发图看看

kqyy

add edta

duanduan48

MSC的消化时间是很短的，那些不能消化下来的可能是内皮细胞、单核巨噬细胞、脂肪细胞等。
: n; W5 J3 V+ l不少文献中提到MSC传到10多代还是会有圆形细胞，即使通过CD11b negative selection 的方法培养，也还是会观察到圆形细胞。+ a  Z8 A8 z! E5 H# D
小鼠MSC有很明显的异质性，只要能通过诱导及表型鉴定符合一般的文献报道即可。

china1983chen

BMSC细胞不用消化这么长时间的，可以通过消化纯化一下细胞，超过一分钟 消化不下来的就不要了

圣牛

从图片看，细胞培养的挺好的，应该可以传代了，时间久了易发生接触抑制。胰酶消化时间一般控制在一分钟左右就差不多了。