小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

angel-sakura

第一张图片是我消化前的，第二张图片是我消化14min后的（0.025%EDTA+0.25%胰蛋白酶），消化的结果和前2次消化的结果一样，只是把杂细胞消化下来了，BMSC还紧紧贴着，现在实在是没办法了，我们实验室的学长建议我把细胞刮下来。。。在此之前我想问一下各位消化小鼠BMSC是怎么消化的？胰蛋白酶的浓度是0.25%还是要高一些？EDTA的浓度是不是不够高？我也在消化后用枪吹打了。# z; q* z; Y6 i3 U
/ Q: [; b; a) t* d7 X' g# Q* d* i7 L, W

' m/ S# P" h) C+ R) I4 o
/ l; C, s3 z: q, K/ X. J8 j" O9 X; d4 f0 F) X7 E. q
此外，下面2长图片是我消化下来的细胞进行的传代培养
/ M6 q7 i/ B, W1 W% P4 x+ M
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感觉不像是BMSC，更像杂细胞，但有人说先消化下来的是BMSC，杂细胞不容易消化下来。# e) b" a. U- r4 ^$ Q  n
不知道他们这样说的是养的大鼠吗？大鼠的BMSC好像是这样的。我养的是小鼠BMSC。。。

shangshiwang

回复 sports123 的帖子* i6 R3 ?2 g: ~7 o& _$ |# W9 [# T

, @5 Z1 @3 p; K# @2 n$ q请问同学你还在养小鼠的MSC吗？能不能分享一下培养体系，感觉自己培养的细胞老化现象很是严重。

可乐

预热一下PBS和胰酶，在消化一到二分钟，

sports123

回复 angel-sakura 的帖子  ^3 u) F/ r, {2 h
% D# L  [5 r8 m' F) J9 k
你可以换一下胰酶试试，我们也是消化小鼠的骨髓间充质，0.25%的胰酶，Gibco的的，消化2mim,95%的细胞都可以消化下来的

shangshiwang

回复 liqiang8589 的帖子" R1 g8 O. N* o/ J; [9 F8 E

' L7 J. x( Q$ z4 t; F请问贵实验室用的是什么批次的血清分离培养BMSC，效果怎样？

liqiang8589

首先检查下胰酶是否失效，还有PBS冲洗是否完全。  A) ?' Z; G; Y/ H, \7 j2 F9 K
消化14分钟后可能对细胞损伤严重，我们实验室消化MSC没有超过过5分钟。

yangyaping

胰酶是需要37度预热的，这样效果最佳，还有就是在消化前需把瓶内用生理盐水冲洗一遍，不然消化效果不好

Leo_yihan

我也遇到过这个问题，之前加了胰酶需要10分钟左右才能消化下来，而且还需要大力的吹打才能下来，后来我加过胰酶把细胞放温箱3min就全消化下来了

一僧化画

消化前细胞要用PBS最少洗两遍，保证没有血清残留，要不然会影响胰酶活性

一僧化画

我更感觉消化下来的应该是MSC而未消化下来的可能是成纤维细胞，不知道我认为的对不对，最近也在提小鼠间充质干细胞，摸索中