向高手求助，ips慢病毒包装具体是怎么操作的？

pujixing

zlx0814同志问的问题其实是关于Lentivirus包装的。不同实验室可能会有不尽相同的protocol，这里仅根据个人经验写一个简便但可行的磷酸钙转染法。希望同行多多参与指正。% E7 I9 \$ q2 \, l7 e' A
其主要步骤如下：
* T5 i, A0 o4 y" S+ W- Q0 v1）Day1：传293T细胞，40~60%；
1 o) L3 x6 a$ g3 m5 b2 P2）Day2：转染前最好先换一次液（5ml即可）；
+ Z' e( s: W- x/ B1 C3）转染细胞，一般是Vector：delta8.2:VSVG的比例为5（或4）:3:2，对10cm dish，用的总质粒量不宜超过40ug（每个人的具体实验可以先摸索一下，一般20ug也就够了）；具体的试剂网上可以查到，这里不再写出。但主要的solution是2M CaCl2 （最好用SIgma的cell culture级别的，纯度不要低于97%）和2XHBSS；- p8 y" D2 t- W, m! A
4）对10cm dish来说，可以配制1ml工作液：即含有65ul 2M CaCl2，适量的质粒，并用MilliQ水补齐到500ul，混匀；8 x; K, w% l. c
5）向管中逐滴加入2XHBSS，然后用枪小心缓慢吹打若干次（个人习惯10次左右），静置10-20min（室温）；
: L. _  c8 _/ f7 k  U/ Z$ ]: f6）加入到前述铺有293T细胞的培养皿中，摇匀，多数情况下，镜下可看到细密均与的颗粒；  d6 X5 ~7 r" P: B
7）8hr后换液，这时可用PBS清洗掉过多的颗粒；" S8 l3 L$ I% `+ r- Z" f
8）继续培养，收集转染后36hr，48hr，72hr（视具体细胞状态而定）等时间点的病毒上清。