小鼠胚胎成纤维细胞的制备及处理(饲养层)

ppcl2

回复 6# qgjin ( E9 v' Y; Q( V4 D+ b
Feeder一般用E12.5或E13.5，最迟不超过E14.5，俺取的MEF都是去头，掐尾，去四肢，内脏全去掉，剩下的躯干剪碎，再0.25%的含EDTA胰酶消化20分左右，加含FBS培养基吹打均匀并停止反应，离心，用吸管小心去除大多上情，再用10多毫升培养基重悬，培养，第二天换液，然后一直养到差不多满了。

qgjin

4 q' ^  o3 \( c4 C& {6 C

俺感觉这个protocol不咋地哈，有几个人用来自E16胚的MEF来做feeder？" g& w% ]5 V1 C. u- s$ H
remove and discard placenta and fe ...
& V: @  u5 \3 H) i# l' jppcl2 发表于 2010-5-7 09:50

$ l- Z" d$ D( n; M# Z/ Y3 P  ?  A; ^0 ~+ k; L) M$ u
只是在论文中搜到的，请讲细一些好吗？（譬如：E？胚最合适？； 取哪个部位的细胞效果更好，怎么取？；终止消化要添加多少培养液？为什么？） 我是新手不太懂 请教一下。

w1986725

请教一下，是用胶原酶Ⅱ还是Ⅳ？

ppcl2

回复 3# w1986725 # K0 ]+ ?- |& k0 c7 Y' `& i% Y
差不多，也是15到20分钟左右。

w1986725

都没有人用胶原酶处理的吗？我想知道胶原酶处理的时间啊！~

ppcl2

俺感觉这个protocol不咋地哈，有几个人用来自E16胚的MEF来做feeder？
# o7 r5 y: [. W' uremove and discard placenta and fetal membranes, head, liver and heart.这个也粗放了点哈！
# K; `: \6 W2 C. TE16那么多细胞，3ml培养基，不是开玩笑吗？