肌源性干细胞 组织消化 几种酶的 量化 比例！请高手指教！

学习快乐

现在本人 正在 提取分离 肌源性干细胞，但几次都是因为消化过度，第二天细胞死亡，以失败告终。
0 B9 m9 j1 I( i% A! d请高手指教，胶原酶 dispase 和 胰酶的 具体 建议 毫升数 和比例。

dky9829

谢谢版主

87hgl

我现在取乳鼠的肌源性干细胞，组织剪碎后大约有1.5ml左右，加入1%Ⅰ型胶原酶1ml，Dispase Ⅱ 2.4U/ml 1.5ml，CaCl2 0.25mmol/L  0.3ml，水浴37℃约1个小时，期间吹打，过滤离心重悬就可以了，不过就是第二次贴壁后没有见到贴壁细胞。是不是用的是玻璃瓶呀？

zmf123456

外文版的具体细胞培养步骤                                 

lazyworm

没想到几年后有这么多人在做肌源性干细胞，当年我就是用胶原酶和胰酶消化得到的细胞非常少，本来得到的细胞又不纯，想往下面做进一步的实验非常难，所以还是买了dispase，效果真的是很明显，不过也像学习快乐一样，PP5后就污染了，挺遗憾。

87hgl

回复 tanhehe1006 的帖子5 A7 ]2 v  q7 Y4 [9 A: P, I

5 o. t" o4 |0 F" ?( Z: |说错了，应该是第二天没有见到细胞贴壁的~~~

87hgl

回复 tanhehe1006 的帖子
1 K# y+ X- ^1 f1 y  P
, O2 {  s9 |6 P' r! }: A你好，具体问一下胶原酶的型号，我也在养肌源性干细胞，用的是1型胶原酶，1%浓度（这时看到一篇博士论文上说的），是不是浓度有点高，第二天就见到细胞贴壁的。

ysfu

太有收获了！

无知后辈

回复 tanhehe1006 的帖子
2 g3 s; o/ o7 Q, i7 c( @$ Q1 |: ?- V- _$ A( G' D: M5 M
请问我使用I型胶原酶（0.1%）加上胰酶(0.25%)能否分离出MDSC呢？如果可以消化顺序和各自时间大约多少呢？因为这个dispase实在是太贵了，谢谢

lxp10405

终于看到外文版的具体细胞培养步骤了。多谢！