肌源性干细胞 组织消化 几种酶的 量化 比例！请高手指教！

学习快乐

现在本人 正在 提取分离 肌源性干细胞，但几次都是因为消化过度，第二天细胞死亡，以失败告终。! t/ Y" j; Q8 |- X% w4 u
请高手指教，胶原酶 dispase 和 胰酶的 具体 建议 毫升数 和比例。

tanhehe1006

胶原酶0.1%就凑效了1 g7 n: `& M+ v0 _% b
dispase我用的是二型，只要总单位数在2.4U/ml就可以了
: W7 M& `5 c& I) A  T以上两个酶有混加的也有分开的，终浓度掌握好。液体和组织块的比例一般在5-1：1都是有效的
& g* Y5 v! ]/ n; N5 \最后胰酶的消化建议还是轻一些，1：4就好，用PBS稀释

学习快乐

多谢。

学习快乐

做了 几次，细胞经常污染。6 q+ n2 D4 c: I7 R
最后一次 细胞已经长到 pp5了，又污染了。
4 U' S# `3 b: A实验室条件是差。, R( \) f* S; A/ i9 d) b, |  t
但感觉是不是 操作 还是 培养基有问题呢？
/ t3 E* |% i1 S. a6 V( N把培养基 放在培养瓶里面 放培养箱 没有发现污染。
2 e1 U4 G$ x) E2 T5 ^# V: z1 i各位高手 能不能 给点 你们 成功的 详细 步骤 指导指导啊。

hyde

可能是环境，试剂问题，要相信自己的操作，我在国外交流养myoblast，就照着他们的protocol做的，不太会污染，过程基本类似

lxp10405

终于看到外文版的具体细胞培养步骤了。多谢！

无知后辈

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1 I2 A4 t) h: J$ G) E# |( S
9 x. P3 E6 X  p5 L& w# s1 o请问我使用I型胶原酶（0.1%）加上胰酶(0.25%)能否分离出MDSC呢？如果可以消化顺序和各自时间大约多少呢？因为这个dispase实在是太贵了，谢谢

ysfu

太有收获了！

87hgl

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, b, ^" I) \  U4 ^) W# \. d' f" e# M7 b: z( ]& h, V2 ~
你好，具体问一下胶原酶的型号，我也在养肌源性干细胞，用的是1型胶原酶，1%浓度（这时看到一篇博士论文上说的），是不是浓度有点高，第二天就见到细胞贴壁的。

87hgl

回复 tanhehe1006 的帖子0 H6 H' O$ u  l! y0 |7 H
' b/ j8 b5 z$ k) _9 K8 @( a
说错了，应该是第二天没有见到细胞贴壁的~~~