肌源性干细胞 组织消化 几种酶的 量化 比例！请高手指教！

学习快乐

现在本人 正在 提取分离 肌源性干细胞，但几次都是因为消化过度，第二天细胞死亡，以失败告终。
- T9 d( E4 p8 G4 p) j" v. F请高手指教，胶原酶 dispase 和 胰酶的 具体 建议 毫升数 和比例。

tanhehe1006

胶原酶0.1%就凑效了
$ `3 i7 e4 ?' T# S+ r6 a. z. ydispase我用的是二型，只要总单位数在2.4U/ml就可以了& G+ m! k4 l, A6 H) m" H  ^) ?1 ]
以上两个酶有混加的也有分开的，终浓度掌握好。液体和组织块的比例一般在5-1：1都是有效的
! R, s  i/ b) z( V& z4 [最后胰酶的消化建议还是轻一些，1：4就好，用PBS稀释

学习快乐

多谢。

学习快乐

做了 几次，细胞经常污染。
' H" W2 j# T$ }, ~最后一次 细胞已经长到 pp5了，又污染了。
$ L9 N0 ]; t, [, i实验室条件是差。0 L8 C4 u5 u7 e+ |: z  l8 q
但感觉是不是 操作 还是 培养基有问题呢？
: l8 n! f- K& S) E* ?把培养基 放在培养瓶里面 放培养箱 没有发现污染。3 p; @# ]7 ~, V+ y2 x
各位高手 能不能 给点 你们 成功的 详细 步骤 指导指导啊。

hyde

可能是环境，试剂问题，要相信自己的操作，我在国外交流养myoblast，就照着他们的protocol做的，不太会污染，过程基本类似

lxp10405

终于看到外文版的具体细胞培养步骤了。多谢！

无知后辈

回复 tanhehe1006 的帖子8 L7 ~. o! Z6 [
) Z5 r" \. M6 F2 C
请问我使用I型胶原酶（0.1%）加上胰酶(0.25%)能否分离出MDSC呢？如果可以消化顺序和各自时间大约多少呢？因为这个dispase实在是太贵了，谢谢

ysfu

太有收获了！

87hgl

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) L4 O' q% T8 O2 p9 j
! A  |2 J# w1 ?+ ]3 ]4 L* d你好，具体问一下胶原酶的型号，我也在养肌源性干细胞，用的是1型胶原酶，1%浓度（这时看到一篇博士论文上说的），是不是浓度有点高，第二天就见到细胞贴壁的。

87hgl

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& H5 D* M1 @4 \  c4 v0 z
3 h' X+ S2 N' i# l说错了，应该是第二天没有见到细胞贴壁的~~~