脐血MSC和红细胞裂解液的讨论

金戈

脐带血中间充质细胞的含量很低，比骨髓还低

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氯化铵红细胞裂解液（10×的储存液）# q  I5 J. l; v5 G8 y) n
80.2 g NH4Cl (1.5 M), O' B' u) f7 e+ ^2 y2 B
8.4 g NaHCO3 (100 mM)- P% U, o0 Q+ d0 y$ H# H3 Q* H. v) K/ x
3.7 g EDTA二钠 (10 mM)
1 G1 B9 z0 V9 D加水至900ml，然后用1N的HCl或1N的NaOH调节pH值至7.4。最后加水至1升。7 S# n8 W0 A" T' i
该10×的储存液可在4℃保存6个月。1 P4 B3 i6 q/ f: s0 ^
工作液的配制：在使用前蒸馏水稀释10倍即可。（1份储存液加上9份水）。工作液用来裂解红细胞。

金戈

脐带血中间充质细胞的含量很低，比骨髓的还低，所以有可能会分离不成功。

金戈

回复 willow0711 的帖子$ ~+ @$ W0 c5 q; `$ r
. C2 I) {& o- {( K+ H
细胞用离心后的压积，不用悬液。加的体积比例要看你样品中红细胞的量。比如外周血，红细胞比例比较高，就要多加，如果你消化的组织红细胞量少，就可以少加。" P2 f* V2 u( f( |
1 ?6 D# X$ c) Z5 H& a$ M% y) b
加入约5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
- S5 f9 H4 ]$ ?% r2 B例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。裂解
) f# N  C4 o$ g8 ]% f' a3 }( {! b2-5分钟，加入培养基或PBS洗涤离心。如果一次裂红不完全，还可以再重复一次。