脐血MSC和红细胞裂解液的讨论

金戈

脐带血中间充质细胞的含量很低，比骨髓还低

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氯化铵红细胞裂解液（10×的储存液）/ X) A# \5 O9 L9 V
80.2 g NH4Cl (1.5 M)
5 V( j( z5 I' U  h0 F8.4 g NaHCO3 (100 mM)6 U( ]' Y) T7 _! |$ U: r+ X# w
3.7 g EDTA二钠 (10 mM)
1 n+ P& v& [  Y' y+ Q加水至900ml，然后用1N的HCl或1N的NaOH调节pH值至7.4。最后加水至1升。
" l' F: ^" _- f% M, z2 U该10×的储存液可在4℃保存6个月。
7 O8 m6 v' H1 }/ l) x& t- Z5 T/ F工作液的配制：在使用前蒸馏水稀释10倍即可。（1份储存液加上9份水）。工作液用来裂解红细胞。

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脐带血中间充质细胞的含量很低，比骨髓的还低，所以有可能会分离不成功。

金戈

回复 willow0711 的帖子* x+ a' w! ~. \4 N, _1 ^; q+ T

) y1 c, h  @8 r/ @8 y0 m细胞用离心后的压积，不用悬液。加的体积比例要看你样品中红细胞的量。比如外周血，红细胞比例比较高，就要多加，如果你消化的组织红细胞量少，就可以少加。9 S- s% P1 S) p% @# m% A! o

" L9 L% p; h9 E- z' H$ Q* {加入约5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。- f) S8 ~6 t3 z  p/ U/ a
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。裂解
! a! e" R6 J8 T5 T. F) ~  y' l2-5分钟，加入培养基或PBS洗涤离心。如果一次裂红不完全，还可以再重复一次。