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各位 有没有 肌源性干细胞 转染 相关的 文献或者 资料? [复制链接]

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楼主
发表于 2010-5-12 19:15 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本人 要做 肌源性干细胞 转染 相关的课题。
, K7 b0 ?" I. K不知道那位 做过的 把经验和注意的 问题 给讲讲。
$ ?8 T& F' ]: ?  |多谢

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小小研究员

沙发
发表于 2010-5-12 20:03 |只看该作者
最好把你的问题具体一些

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藤椅
发表于 2010-5-12 20:04 |只看该作者
好的。我把问题汇集一下 和大家讨论。多谢。

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小小研究员

板凳
发表于 2010-5-17 19:10 |只看该作者
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回复 1# 学习快乐 $ a' k6 D. h6 n# s
我一直在做牛肌源干细胞的转染。肌源干细胞跟成纤维相比,转染的难度要大很多。我试过FuGENE HD,LIPOFECTAMINE 2000 ,效果都不是太好。用GFP做报告基因,基本上一个视野只能看见5个左右的阳性信号。后来又试过PEI,感觉这个还可以,起码转染之后的细胞做western以及RT-PCR都是有结果的。" u; ]. H4 E. Z$ N2 V* B
不知道对你有没有帮助,希望大家多多交流。呵呵~
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报纸
发表于 2010-5-18 17:42 |只看该作者
回复 4# 念想儿 8 h! `+ R' }8 ~

- l0 S1 h" J  j
% T4 @- |* Z' v8 V4 a    你好。我现在只是实验初期。不知道怎么回事,肌源性干细胞 培养培养着就污染,反复几次了。培养基也没事。郁闷啊。

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小小研究员

地板
发表于 2010-5-18 19:05 |只看该作者
回复 5# 学习快乐 请问你那个物种的细胞?能不能把你的培养液配方说下,我可以帮你看看~

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发表于 2010-5-19 15:47 |只看该作者
回复 6# 念想儿
) c. ?! U" L+ w1 j& X2 u1 e我是做 S-D大鼠的 MDSCs。培养基的
- a" b- \) E  O* c0 c/ }& q+ _配方:DMEM(低糖)+FBS+马血清(8:1:1)。开始也叫了 CEE(鸡胚提取物)但太贵了。实验又不顺利,就暂时 没用。希望养的好的时候 再用那部分由CEE的培养基。一直没有加过双抗。但昨天有的同学 建议我加双抗,毕竟实验室条件也很差。( j* K- R/ a- h! W
下面接下来要免疫荧光鉴定。也有很多请教。$ X( B0 i0 O5 V' e3 _! b
我的邮箱:anan_1125@126.com
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小小研究员

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发表于 2010-5-20 15:39 |只看该作者
回复 7# 学习快乐 2 K, o  o2 m+ i
哦,是这样。我们实验室做的是牛的肌源干细胞,那培养方面可能有所不同。我们的培养液配方是DMEM+10%FBS+20%HoS,另外在养细胞的瓶子底部铺了左旋多聚赖氨酸促进生长贴壁。双抗一定要加,还要及时传代,不能马虎。鸡胚提取物我也用过,但是它只会让细胞加速生长,对细胞的分化没有什么作用。由于cell line 不同,也不知道我说的这些能不能帮到你,希望我们共同探讨,呵呵~~
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