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张辛1 杨民3 林霖1 陈苹2 马康涛2 敖英芳1 周春燕2
" B' o% c* ?' p' |1 北京大学第三医院运动医学研究所(北京100083)
0 i8 D9 x! g, T' W5 R) ~* ?2 北京大学医学部生物化学与分子生物学系 3 皖南医学院弋矶山医院骨科4 v0 T* o* H7 X: Y+ I9 \3 r1 y
摘要 目的:验证核心结合因子(Cbfa1/ Runx2) 的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达8 \6 b8 E' d, U, B0 D; i
蛋白。方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化。将Cbfa1/ Runx2 cDNA 的全长
* P. c, W7 Q8 p% i% S2 Q3 W序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack 上,在BJ5183 细菌内和pAdEasy1 同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad - Cb26 q5 W- a, o/ \4 q5 h, L
fa1/ Runx2 。经酶切、PCR 鉴定,线性化后以脂质体法转染293 T 细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP 对病
- F* k! a/ \" k* }) k毒滴度和感染效率进行监测。通过RT - PCR、间接免疫荧光检测Ad - Cbfa1/ Runx2 感染脂肪组织来源干细胞
8 l) D4 Y; I- w# J后Cbfa1/ Runx2 基因的表达。结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍。在特定诱导条件下,可向成, I+ o& c) Q& ]
脂细胞、成骨细胞分化。酶切及PCR 鉴定证实Cbfa1/ Runx2 基因重组腺病毒载体构建成功。Ad - Cbfa1/5 \" R1 A% A) R' x; b$ ?0 _
Runx2 对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81. 39 %。转染3 天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源: A6 @* [; ?8 N! _
干细胞中Cbfa1/ Runx2 蛋白的表达。结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/6 Q% L+ ^: K( I* H* Z
Runx2 基因的重组腺病毒载体,证明了Ad - Cbfa1/ Runx 可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/ Runx2
F/ ~! L: U: P) A7 }4 [蛋白。# u$ D1 [% `' t; _- N. m; |
关键词 核心结合因子;脂肪组织来源干细胞;腺病毒载体8 h' S- z0 x9 i+ e- u J+ l* `, a9 V
]- m2 [3 I4 Z4 q" J0 J+ s
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发表于 2009-2-20 20:37
