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张辛1 杨民3 林霖1 陈苹2 马康涛2 敖英芳1 周春燕2/ \8 k; \$ Z& R( R* r' u
1 北京大学第三医院运动医学研究所(北京100083)
4 J5 c) T- k8 Q5 i2 北京大学医学部生物化学与分子生物学系 3 皖南医学院弋矶山医院骨科
. |& M( l/ n' b( U" L' m摘要 目的:验证核心结合因子(Cbfa1/ Runx2) 的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达& y; b# A5 z! y3 J! I: U
蛋白。方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化。将Cbfa1/ Runx2 cDNA 的全长) x( f* j7 t& A$ |
序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack 上,在BJ5183 细菌内和pAdEasy1 同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad - Cb2
! _' D/ W. f* O( Lfa1/ Runx2 。经酶切、PCR 鉴定,线性化后以脂质体法转染293 T 细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP 对病6 k9 {5 t: z/ ?; T
毒滴度和感染效率进行监测。通过RT - PCR、间接免疫荧光检测Ad - Cbfa1/ Runx2 感染脂肪组织来源干细胞. M& p: N/ d8 E( E
后Cbfa1/ Runx2 基因的表达。结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍。在特定诱导条件下,可向成
; _5 h @/ |$ `6 f8 V! n4 x脂细胞、成骨细胞分化。酶切及PCR 鉴定证实Cbfa1/ Runx2 基因重组腺病毒载体构建成功。Ad - Cbfa1/
5 P, p$ e$ Y- d% n2 T( n8 W' yRunx2 对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81. 39 %。转染3 天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源
7 B; Y, t% c9 y$ j9 c! u' X8 v干细胞中Cbfa1/ Runx2 蛋白的表达。结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/* ^( v, w a1 G% M( D1 z5 ]
Runx2 基因的重组腺病毒载体,证明了Ad - Cbfa1/ Runx 可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/ Runx2
7 D! O! G, S+ `' Z蛋白。
' S# R2 ?2 S1 C2 g/ ~; P: P关键词 核心结合因子;脂肪组织来源干细胞;腺病毒载体 ~* H& G# C. \# l* a$ F/ T
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发表于 2009-2-20 20:37
