求教 脐带离心出问题

stemcell8

取脐带离心剪碎的组织块居然怎么也离不下去 很诡异啊 大家有没有遇见离心离不下的情况啊 ？什么原因呢

chb611301

或者再用胶原酶消化后，加入1/2体积的0.05%的胰酶，也会相对好很多，但是胰酶处理的时间不要太长，否则也会伤到细胞的！

chb611301

用大量的PBS或生理盐水稀释用胶原酶消化的组织块，500ML左右，再分到50ML离心管中离心，这样溶液就不会太粘稠！稀释后离心力至少要在500G以上才可以离下来啊，根据你的离心机的离心半径去调整。转速也不要太高，会损伤细胞的！

清影

回复 157238360jwj 的帖子
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4 T# U0 q( A3 H8 r呵呵，你们消化用复合酶吗？消化时间是多久哈？10cm的脐带细胞得率一般有多少？多交流哈，谢谢你哦！

157238360jwj

很简单，一般刚消化完的组织液很粘稠，可以采用稀释，用来稀释的方法很多，可以加一点培养基啊，DPBS,或者生理盐水液可以，8 Y* }1 c" ^! {$ k/ m' H. w3 S
如果未消化的组织块不要的话，可以稀释后先低速离心（600r,5min），缓慢吸取上清再2000r，20min收集细胞。' p# ]# Y. K) x$ }9 g
一般没有消化完的组织块能培养出的细胞很少，且容易对原代培养产生影响。

人医

你们有没有羊成功了

人医

你们有没有羊成功了

sydfxt

回复 xixitao 的帖子% Q, m" `+ h5 h3 X( s5 t" w5 f
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你直接分装的效果咋样?这几个月又相到别的更好的方法了吗?请赐教啊

清影

回复 sign_huhu 的帖子. w+ f4 N9 _# i6 k* k7 {  B
2 R0 _  e) C: t, d  B
脐带之间可能存在的差异就是华通氏胶质的多少。粘稠的原因不是这个引起的，可能是细胞破碎后DNA交联和透明质酸吸水造成的，具体原因我们也在找。脐带最好要新鲜的，从采集到使用时间不要超过24小时

sign_huhu

脐带的问题 换一根