求教脐带离心出问题 - 间充质干细胞专区干细胞之家



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stemcell8

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楼主

发表于 2010-5-14 22:23 |只看该作者 |正序浏览 |打印

取脐带离心剪碎的组织块居然怎么也离不下去很诡异啊大家有没有遇见离心离不下的情况啊？什么原因呢

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23楼

发表于 2010-12-27 08:47 |只看该作者

或者再用胶原酶消化后，加入1/2体积的0.05%的胰酶，也会相对好很多，但是胰酶处理的时间不要太长，否则也会伤到细胞的！

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chb611301

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22楼

发表于 2010-12-27 08:45 |只看该作者

用大量的PBS或生理盐水稀释用胶原酶消化的组织块，500ML左右，再分到50ML离心管中离心，这样溶液就不会太粘稠！稀释后离心力至少要在500G以上才可以离下来啊，根据你的离心机的离心半径去调整。转速也不要太高，会损伤细胞的！

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清影

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21楼

发表于 2010-12-27 08:44 |只看该作者

回复 157238360jwj 的帖子' I- x: \* M0 }, g5 X7 }

呵呵，你们消化用复合酶吗？消化时间是多久哈？10cm的脐带细胞得率一般有多少？多交流哈，谢谢你哦！

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157238360jwj

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20楼

发表于 2010-12-24 23:44 |只看该作者

很简单，一般刚消化完的组织液很粘稠，可以采用稀释，用来稀释的方法很多，可以加一点培养基啊，DPBS,或者生理盐水液可以，
如果未消化的组织块不要的话，可以稀释后先低速离心（600r,5min），缓慢吸取上清再2000r，20min收集细胞。
一般没有消化完的组织块能培养出的细胞很少，且容易对原代培养产生影响。