请教慢病毒感染细胞的详细步骤

zzp40

最近要做慢病毒感染，请问哪位大侠有比较详细的实验步骤？操作时有哪些需要注意的地方呢？

细胞海洋

http://www.stemcell8.cn/thread-20812-1-1.html

aphple85

看一个师兄做过慢病毒转染，自己做过逆转录病毒转染，和慢病毒转染一样：7 B' ]1 r/ `& w! J6 p
   1）收细胞计数后种培养板（根据自己的目的种不同大小的培养板）。
7 X4 h, E+ ]6 D- U% c( {   2）悬浮细胞直接用含10ug/ml polybrene 的完全培养基悬细胞后种板子；贴壁细胞在前一天种板子，待其贴壁后弃旧培养基，换含10ug/ml polybrene 的完全培养基换液。
; [" f  F0 a. S0 O* g   3）加入病毒（根据病毒滴度确定加入量的多少）。
( u8 S: R" k/ p; ]. R( ?9 O* {. d5 h   4）24小时后补液（用不含polybrene的完全培养基）。

cm11011

实验流程如下： 　
; g/ q1 K( [& y& ?' @, {* _1.  使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒 　　液； 　　- C4 l4 t; ?! ~4 V" d5 \8 R; e
2. 浓缩、纯化病毒液； 　　! K, K4 [2 J- f+ F, c+ x
3. 用高质量的病毒液感染细胞； 　　
6 Q0 p3 b! r  e6 w4. 通过定量PCR精确测定病毒滴度（高精确滴定方法）和Western 分析实验结果； 　　

zengfuxue

顶一个 学习

zengfuxue

非常感谢 已下载

liutianzhu

回复 4# cm11011 $ R( H% O( g  w$ Y
妹妹好人啊

norther817

谢谢

学习快乐

非常感谢，学习中啊。

何英姿

非常感谢