脐带间充质干细胞 原代培养时间

xiegm

请问各位高手，2CM脐带，混合消化 （胶原酶II 1mg/ML 胰酶 0.25％）37度 1小时，T25 培养，DMEM（低糖），10％FBS(5ng/ML FGF), 需要多久能传代（80％）？我的11天了，有些地方比较密，细胞团之间还有很大的空间，是否应该传？还有一批9天了还没有看到怎么长，FBS是否15％更好呢？FGF是不是需要增加浓度（10ng/ml）?

待鹤

原代长得好的话五天左右就可以传代。
! J  R5 m) q6 v5 E9 w" d+ x- A对于不均匀的情况，不用等到长满再传，那样的话有些colony的细胞就容易衰老了。
+ i# M) @4 x6 A血清10%即可。! }5 Z' T* D4 c2 D
FGF你现在的浓度已经挺高了，因此不需增加，倒是可以酌情减量。

askage

局部密集就可以传代了。我们没加生长因子。一般10天左右就可以传，稍次一点15天左右。你可以多做平行样。采自不同个体的脐带MSC含量是不同的，同一脐带不同地方MSC也是不同，而且这种混合消化一般不是很均一，导致接种培养批次内，批次间都有很大差异。有些长的很快，有些长的慢。

zsc78

原代一般需要10-15天，要有耐。不需要细胞因子。

xiegm

多谢给位，有没有人试过20%FBS， 是不是长的快？DMEM/F12是不是比DMEMLG好些？
* N! O( v7 O5 E. V& I
8 n& `) e; M) v
6 U# c8 J$ e4 b. B% D2 i2 H: Q  r/ p5 I
& ^5 q$ s* O4 D1 `* o1 l
! p* s+ i2 T5 H% B8 ^) ^. f
) j5 Q! M- A) |

& U6 @* T+ P# Q% n- j! H
+ Q' E) c; S$ d! F* V8 e1 C%

dan

第一代是很慢的，10天吧，第三四代时就疯长 ，第五六代又慢下来了