percoll配制紧急求助（在线等待）！

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大家好，我要分离人的骨髓间充质干细胞，请问percoll(1.131，法玛西亚公司，国内分装)分离液怎么配制成1.073的密度 ？

mechatlas

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fish619

Percoll分离液原理及浓度配制：　　
- G" e) X* m4 z. d7 e' s3 Q1 e(一)　原理
3 H7 U( ~$ G  c. v+ {: ^  v　　Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。& @3 Z" f7 |6 P, T/ [# P* C, Z' O
　　(二)操作方法及注意事项: K4 P) E; F9 F4 Z" [
　　1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。5 p  v' ]! E( D& d" n( A& v# ^
Percoll浓度(％)　　70　　　60　　　50　　　40　　　30  　　20
1 H3 A  `8 t! G6 M1 d　　比重g／ml　　　1.090   1.077   1.067   1.056   1.043   1.0315 V% U9 [* I0 G" S
2.　不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
5 @0 i# B, K. s* ~$ n; F. @/ N: ?* s　　3.　装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
$ ~* \: u% r& P3 a- e　　4.　离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。3 {- }6 W/ j) p) x1 @$ \' h
　　5.　取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
: |8 ?* D( n. }, W4 x如需用直接配制某一密度的分离工作液，则可以按公式稀释PERCOLL原液，得到想要的密度（最后的工作液）$ S: D# d- D2 @/ u
以下为公式：Vo = V (d – 0.1 d10 – 0.9) / (Do-1)7 \! k8 S* M* Z% E  |" ^- r
注明：
$ j* c2 C7 t4 r8 e& @Vo = 为所需PERCOLL原液（未稀释）的量 ；V为最终工作液量; X1 g) Y9 G7 F* U; m
d = 为最终工作液密度  ； do 为PERCOLL原液密度。
  [6 J6 Q: `2 w' @' y) Nd10= 1.5 M NaCl 溶液的密度(1.058) 或 2.5 M 葡萄糖溶液的密度(1.316)' Y, }9 k+ f. K
5 S4 Q6 y7 _+ x3 X* d( i

* ~1 Z+ l+ Z$ ?如果以上还不能让你很明白的话，就看SIGMA的PERCOLL 说明书吧, z# `7 A4 J* P# y/ |  S7 V6 P

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但是没有配到1.073的方法，只有配到1.077阿，是不是配到1.077就可以了