percoll配制紧急求助（在线等待）！

kqyy

大家好，我要分离人的骨髓间充质干细胞，请问percoll(1.131，法玛西亚公司，国内分装)分离液怎么配制成1.073的密度 ？

kqyy

但是没有配到1.073的方法，只有配到1.077阿，是不是配到1.077就可以了

fish619

Percoll分离液原理及浓度配制：　　( `- D2 t+ K* @% W; |+ V, B
(一)　原理! e6 K! a2 P/ a! @/ K
　　Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。( S. I( M2 J' {, w3 c9 [( K
　　(二)操作方法及注意事项
: R; a/ K' Q4 i+ k. M% z9 d$ J　　1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。
0 |% R4 i9 c2 s. m1 h; U4 k5 e* hPercoll浓度(％)　　70　　　60　　　50　　　40　　　30  　　209 Y, B) z0 y$ p2 u: [! ]1 n1 |2 |
　　比重g／ml　　　1.090   1.077   1.067   1.056   1.043   1.031: S7 ~" H- r; p0 T" H; {
2.　不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
) g" m3 P% x/ g8 \　　3.　装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
* r6 {1 r3 H- E) D! E) J4 W  ?　　4.　离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
* L: ?3 `$ z4 D2 S　　5.　取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
  N0 D* F5 |2 o" b如需用直接配制某一密度的分离工作液，则可以按公式稀释PERCOLL原液，得到想要的密度（最后的工作液）7 A% A* L  j' l  a; }" }
以下为公式：Vo = V (d – 0.1 d10 – 0.9) / (Do-1)0 F. u+ Y. s$ e9 X2 v" A
注明：
2 |. Q2 O$ L9 q/ YVo = 为所需PERCOLL原液（未稀释）的量 ；V为最终工作液量
7 L+ N- Y. u  F3 K5 D+ vd = 为最终工作液密度  ； do 为PERCOLL原液密度。1 X, h6 P2 W$ ^! ?% g: ~& T
d10= 1.5 M NaCl 溶液的密度(1.058) 或 2.5 M 葡萄糖溶液的密度(1.316)& I# i% I) y. }+ p1 ^- b# J6 l

- d4 f' p7 A* u3 l; ~! K+ Y  m
) Z* c& v( R! A0 d, G: s! c如果以上还不能让你很明白的话，就看SIGMA的PERCOLL 说明书吧
5 v+ l/ `# C2 ]- E7 Y: d. D1 A; _

mechatlas

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