请教如何设计引物，以便用PCR的方法检测外源基因的表达

runsong

我将一个基因用慢病毒载pMSCV体转染细胞，现在想设计一引物检测此外源基因的表达。要遵从何原则，望前辈不吝赐教。

POPOLD

表达？

绿雪

是RT-PCR检测mRNA水平的表达吗？根据你的基因序列设计特异性引物就可以了。

hndxws

同意楼上的意见，应该是用做于RT的，拿未转染的作对照。如果有这个表达产物的抗体，就直接时间梯度收样，做western，这样比较直接。

念想儿

一般的操作都是转染之后的细胞单克隆化吧，之后再设计引物RT-PCR检测以及48h后收细胞做western吧

zhanghuabing11

我们构建的转基因载体在体外检测不到目标蛋白表达，是怎么回事？做转基因动物需要在体外进行检测吗？谢谢！

绿雪

回复 6# zhanghuabing11
2 w: u7 H  _7 s& B
! Y0 @" I) @0 \" N/ t) Z. N6 K& C- G- b9 A4 l
    检测不到目标蛋白的表达？用什么方法检测的呢？在什么宿主表达呢？确认阅读框正确吗？
9 B) J& D9 }* C" P" G7 v   能否把问题说得明白点，大家才能给些建议啊。

shihuijunm

实时监测量的多少，最好用实时荧光定量PCR，设计引物可以在网上收索到

xiangchou812

一般都是先做RT-PCR来检测mRNA有无，然后去做免疫荧光或western检测蛋白表达。

POPOLD

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