培养大鼠MSC有一个多月了，遇到些问题，希望高手能帮着看看（附图）

illidancui

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( G, Y$ c1 d4 F) m小弟培养中遇到几个问题，希望高手能够帮着解答一下，十分感谢。* V) F- A$ B! a9 C8 z/ N. E6 @, y
本人用的全骨髓法培养，GB的DMEM-L，天津TBD优胎，原代24h半量换液，之后基本3天左右换，而且基本不敢用PBS吹细胞，也就晃晃。现在原代细胞还看得过去，但有些成团在一起。主要问题是一消化传代细胞就会变得很扁，铺的很开，有的帖子说是老化的感觉（原瓶消化还是1传2传3都会出现，应该和传代密度关系不大吧）。有师姐说可能是胰酶问题（0.25%+EDTA的胰酶消化20s细胞就开始脱落了，非常快，很诧异），准备用0.125%的试试看。一会看看能不能发些图上来。$ W& Q0 V8 G& j
还有请教个鉴定问题，小弟的细胞之后用来做分化研究的，要是鉴定的话除了测MARKER外，还用不用使用分化培养基来测定分化能力？, K5 F9 {  z4 r5 s% A' }

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7 W; g' T* H: ]+ @$ l0 E在次先谢过各位了

illidancui

这是第二代的照片，有点扁了

illidancui

这也是第二代的，低倍视野

illidancui

这是三代的，杂细胞还很多，主要是看着细胞样子都没心情换液了。

gfzlee

我也是这样的问题，一同请教

zhoujieqian

我是新手，想请问一下怎么分辨哪些是干细胞，哪些是分化细胞~

illidancui

没人解答问题呃，自己再问个问题盖盖楼。6 K0 m% z  @; ~, a2 X/ n
第一张图的细胞本来在细胞室的倒置显微镜观察其铺展程度非常大，基本没立体感；图片是我在其他地方显微镜下的，看着有些立体感还是蛮有差别的，难道说不同的倒置荧光显微镜观察区别都很明显么？

maquanhui.0509

是大鼠骨髓间质干吗？24h有点短，试试72h。

zsc78

换进口胎牛血清试一试，国产血清养细胞株还可以。

illidancui

是大鼠的，记得有个中文文献中比较了24h全量，半量，和3d全量换液区别，结果是24半》3d》24全。个人感觉增殖速度现在没什么问题，主要是总铺展很开，有些老化的感觉。解决不好后便实验都没法继续了，杯具。