关于神经干细胞分化的问题

guojingjing

最近在做神经干细胞分化实验，以前我们也做过，使用的方法也是比较成熟的：将D/F12+EGF+bFGF培养得到的neurosphere分散为单细胞后种在PLL包被的coverslip上，细胞用D/F12+1%FBS分化七天。以前做的都挺好，最近用的海马神经干细胞，已经鉴定过nestin+,但是更换为分化培养基细胞基本在第二天就死光了，碎片很多，最后几乎没有细胞贴壁了。
1 |0 T% m& T% Z  A4 c3 R+ z+ l大家帮忙分析分析这会是什么原因，谢谢！

qingyueqingfeng

在诱导分化前的细胞状态怎么样？我在做分化观察到分化前细胞状态一定要好。

guojingjing

回复 2# qingyueqingfeng , k" S7 a/ d7 O% f2 O' z+ O4 R
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; j: ]: f; z, O6 w    状态挺好的，用同样的细胞做增殖实验就没问题

cortex

建议加一些神经干细胞分化的因子，可能效果好一些。例如：N2，B27，ITS等。因为，不同的细胞株系以及不同物种可能存在或多或少的差异，不管怎么说，楼上的可以试试。

guojingjing

回复 4# cortex
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! [' A" ?* r6 N5 L: B* x1 E4 v    我们的分化培养基中是加了B27的，可是还是状态不好。不知道能不能提高血清浓度

cortex

不同的人分化方法不一样。而且方法非常之多。做分化时，不一定需要添加血清啊！应该来说，养起来是比较容易的事情的。不过，不同的细胞株系可能也存在差异。

shewawa

回复 1# guojingjing 9 D4 A7 ?% a- a- O1 o' H6 v
是不是细胞感染了呢？我只做过些细胞分化真在做神经细胞分化，想向楼主请教下神经分化的protocol。还想请问神经分化后的细胞团贴壁状况如何，我的细胞贴壁状态很差，请问有什么好方法，使细胞更容易贴壁吗？

angelyannan

回复 guojingjing 的帖子
& r) X2 \- v4 ?" J5 ]0 d6 |
9 i1 q) o' ?8 w0 N, o我现在遇到了类似的状况，培养基是一样的，只是FBS的浓度时0.5％，用的是胎鼠E14.5d的大脑皮层，培养的前两天细胞状态比较好，从大概从第三天开始有部分凋亡，细胞悬浮起来，直至第五天细胞死亡量增加，贴壁细胞变少。不知道楼主的问题解决了没有？是不是和细胞的接种密度有关呢？

angelyannan

回复 cortex 的帖子
1 H) o2 g/ T5 i& {' f6 {9 Y( G! A
: V' O, y2 A& P8 s( j您好，请问诱导神经干细胞分化培养基中是否添加血清有怎样的依据？为什么很多文献回选取添加血清呢？而且浓度不易从0.5％到10％都有，而有些文献中有会添加其他的因子，我们如何根据自己的实验目的选取呢？2 L2 p9 [( I, t/ T, ^