请教有关real-time PCR批次间差异过大的问题

zhmgeneral

请教各位老师一个有关real-time PCR的问题
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* Q6 `, R4 Y8 }我做了几个月的real-time PCR了
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) z9 o0 {3 x- j发现批次间结果差异很大
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虽然趋势都是一样的，可是每次CT值差异很大
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7 ^( F4 U  d( ~+ `比如说我有4个组，可能某一次扩出来后，四个组的某基因表达比例为1：3：5：7
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下一次再做，可能就变成1：5：9：13了。。。。5 ?9 _* {' O2 F, Q. G* |8 c7 {; G! j
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虽然说递增是对的、也是理想状态，可是这增加的幅度也太大了点吧。。。
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$ |+ R$ R3 s6 x/ t' j: H0 R; D而且批次间增加的幅度都不一样！
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是不是跟细胞有关系呢？+ `+ D" y4 Y* V
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我每次做Real time用的细胞都是原代细胞，会不会是细胞的批次间差异导致的呢？
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非常郁闷，希望各位老师能给予点拨哈
6 a5 y7 N- s0 @, x$ K1 D) }+ `  x: d8 h, D  _" g# x
小弟在此先行谢过！

hljzyydx

不知道你注意过仪器温度没，我们也遇到过类似的情况，怀疑是环境温度过高，对仪器产生影响

上海过客

做 real -time  没有统计图 等于没有做 。4 x9 _* b7 M7 E8 a
) U' n; e' D* B6 h! Y1 |
我还没有开始做，但是现在看文献是 这样的 。

hndxws

不同批次细胞状态的确是不一样的，RT-PCR一般是相对定量，所以内参显得非常重要。看你举例的数据之间的差异都是一样的，只不过一组是2，一组是4。我估计这可能是在处理数据相对定量时内参发生理变化所致。估计你应该做了重复了，不同时间的实验结果肯定会有出入的，解决的办法就是如楼上所说，不确定的话就多重复几次，重复的结果才比较可信。

上海过客

做三次 以上统计 ，单次，单次  的比 没有任何意义 。3 I2 E/ Q, `! S" N0 k/ Y

9 k& k2 J4 s: c9 _" ]7 C只有统计了才有意义

zhmgeneral

顶起，继续求助~·