请教有关real-time PCR批次间差异过大的问题

zhmgeneral

请教各位老师一个有关real-time PCR的问题
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我做了几个月的real-time PCR了
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2 }8 K+ z9 J1 f/ o; b发现批次间结果差异很大
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9 ?( x( o8 H) l8 j& v+ v虽然趋势都是一样的，可是每次CT值差异很大4 t7 N1 i: [* i) t3 ]9 N! }
/ @: B% k+ p/ ]' J4 B- q1 f
比如说我有4个组，可能某一次扩出来后，四个组的某基因表达比例为1：3：5：7% u/ u& W. E* u, |

& N3 G, W! q6 }下一次再做，可能就变成1：5：9：13了。。。。& b4 p2 }4 Y1 i/ r  ^

0 [9 o# h2 j3 d1 q8 ~* B0 l  d7 ]虽然说递增是对的、也是理想状态，可是这增加的幅度也太大了点吧。。。
7 M3 b: V( l. N9 Z7 j
) A3 Z# [% {3 R而且批次间增加的幅度都不一样！
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3 ?8 ]1 [7 ?! t. m, l是不是跟细胞有关系呢？! ~, }6 q  e0 d( u

$ n9 Y% R9 v4 b/ A$ X  t" n我每次做Real time用的细胞都是原代细胞，会不会是细胞的批次间差异导致的呢？
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非常郁闷，希望各位老师能给予点拨哈
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+ W5 g; s% y5 X! m小弟在此先行谢过！

hljzyydx

不知道你注意过仪器温度没，我们也遇到过类似的情况，怀疑是环境温度过高，对仪器产生影响

上海过客

做 real -time  没有统计图 等于没有做 。
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我还没有开始做，但是现在看文献是 这样的 。

hndxws

不同批次细胞状态的确是不一样的，RT-PCR一般是相对定量，所以内参显得非常重要。看你举例的数据之间的差异都是一样的，只不过一组是2，一组是4。我估计这可能是在处理数据相对定量时内参发生理变化所致。估计你应该做了重复了，不同时间的实验结果肯定会有出入的，解决的办法就是如楼上所说，不确定的话就多重复几次，重复的结果才比较可信。

上海过客

做三次 以上统计 ，单次，单次  的比 没有任何意义 。
& |+ z+ o6 n& S
$ M5 R) l9 q1 ?只有统计了才有意义

zhmgeneral

顶起，继续求助~·