请教有关real-time PCR批次间差异过大的问题

zhmgeneral

请教各位老师一个有关real-time PCR的问题
! R$ n& `" x" s" n, l9 f) g! L. Z, Y  c( R  W/ a
我做了几个月的real-time PCR了, I4 H- k( D" H) L
7 A- c+ Z$ O) M; P
发现批次间结果差异很大, K; d9 [5 a1 n
5 q2 S# A! b; f& M2 h
虽然趋势都是一样的，可是每次CT值差异很大9 t3 g2 X0 z: d/ z, |
6 C: p! q5 t6 Y3 A5 M& T: y- f
比如说我有4个组，可能某一次扩出来后，四个组的某基因表达比例为1：3：5：77 z% P/ q  d+ D: ^- H6 O
5 B9 @3 t  t% ~* D2 O! F$ R
下一次再做，可能就变成1：5：9：13了。。。。8 L( U" z/ K& w2 c

3 I" A& q/ A" z3 s. t5 @虽然说递增是对的、也是理想状态，可是这增加的幅度也太大了点吧。。。! F. [% M  `( i$ a

7 N% x5 `% o) t7 u2 E8 P7 i- O% ~而且批次间增加的幅度都不一样！8 Y$ q4 U/ d! n$ Z
! S+ Z1 @  }5 q# @' Z- `- f) r7 c
是不是跟细胞有关系呢？' l' k6 g" `: k: u% b" Y: g. {: x
# [2 s3 }; J+ Q6 w8 B
我每次做Real time用的细胞都是原代细胞，会不会是细胞的批次间差异导致的呢？
) d) N" k9 Y# G+ _# \% O  t  Q  f. i+ u4 e2 t$ s" T
非常郁闷，希望各位老师能给予点拨哈
- r8 i% y5 V  s- G" m; Z1 l0 ^. J/ `- t, |* z) u- {
小弟在此先行谢过！

zhmgeneral

顶起，继续求助~·

上海过客

做三次 以上统计 ，单次，单次  的比 没有任何意义 。2 w) ?) F+ Q3 c$ T

) G9 u$ D+ X, {/ e* k只有统计了才有意义

hndxws

不同批次细胞状态的确是不一样的，RT-PCR一般是相对定量，所以内参显得非常重要。看你举例的数据之间的差异都是一样的，只不过一组是2，一组是4。我估计这可能是在处理数据相对定量时内参发生理变化所致。估计你应该做了重复了，不同时间的实验结果肯定会有出入的，解决的办法就是如楼上所说，不确定的话就多重复几次，重复的结果才比较可信。

上海过客

做 real -time  没有统计图 等于没有做 。. B9 |) ?7 F, u/ z
6 l) y6 A0 v) S  h6 K2 X
我还没有开始做，但是现在看文献是 这样的 。

hljzyydx

不知道你注意过仪器温度没，我们也遇到过类似的情况，怀疑是环境温度过高，对仪器产生影响