rhBMP2 纳米缓释系统的制备及其对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响

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rhBMP2 纳米缓释系统的制备及其对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响# ]7 U; |- u# |9 V+ |- x' Q
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陈发明1, 吴织芬1, 金岩2, 王勤涛1, 杜岩1, 王国芳1
: G$ _; R8 {% w. A# _(1.第四军医大学口腔医学院牙周黏膜病科, 2.组织工程中心, 陕西西安710032)7 a  J/ w( Q! e. t! [4 {/ H. c
[摘要] 目的: 制备甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐( dex- GMA) 载重组人骨形态发生蛋白2 (rhBMP2)凝胶纳米微球$ v9 G8 L( P  b2 |! X- d
(NPs) 缓释系统, 检测其理化及生物学特性。方法: 采用改良乳化溶液聚合法, 制备rhBMP2 纳米微球( rhBMP2- dex-4 b% H  p! {8 ]1 ^! x) ^
NPs) ; 观察其形态、粒径与稳定性, 检测其载药、释药特征; 采用体外细胞培养技术, 将rhBMP2- dex- NPs 和兔骨髓间
- I9 [$ Q! n" Y4 X& q- B4 }充质干细胞一起培养, MTT 法检测其对细胞增殖状况的影响, 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP 活性, 以
7 w0 d: B8 c3 x0 ^, d反应rhBMP2- dex- NPs 对其分化状况的影响, 并与单纯rhBMP2 的作用进行比较; 实验按照培养液中所含成分不同分& @6 j4 z1 o/ }' s  Z* D$ G
为4 组: 培养液中加入单纯rhBMP2(A 组) 、加入rhBMP2- dex- NPs(B 组) 、加入空白NPs(C 组) 和对照组(D 组) , 其中$ j! t! e" J8 s0 k! V* E
A、B 2 组均分别按照rhBMP2 的不同量设置100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L 3 个浓度组, 采用SPSS 10.0 对结果进行统. g7 X( a( n9 }
计学分析。结果: rhBMP2- dex- NPs 大小均匀, 粒径分析表明, 80%的纳米球粒径在20nm 左右, 包封率高达83%, 80%, [6 S: f. c9 Q( |. S3 V! j
的rhBMP2 在前12d 释放; 其具有良好的生物学活性, 能显著促进骨髓间充质干细胞(BMSCs) 的增殖和分化, 效应高; {6 ~( n; p  t) F+ [5 i
于单纯施加rhBMP2 的效应(P<0.01)。rhBMP2- dex- NPs 与BMSCs 共培养3d 内, 反应BMSCs 增殖和分化的OD 值与A
/ G: K7 e' r! B3 u组无显著差异( P>0.05) , 但显著高于C、D 组(P<0.01); 3d 后, rhBMP2- dex- NPs 对细胞增殖和分化的促进作用较单纯3 P/ f& t  \5 O. b6 F9 Y
rhBMP2 明显加快; 5～7d 后, A、B 组差异具有显著性( P<0.01) ; 12d 左右, B 组细胞仍然有较强的增殖与分化能力, 与" {# `' I- O6 Y# K
其他3 组有非常显著差异( P<0.001) , 而此时A、C、D 组间差异已无统计学意义( P>0.05) 。结论: 所制备的rhBMP2-4 K( z8 P' c5 o0 i; u
dex- NPs 形态良好、包封率高, 理化与生物学性能稳定, 可以达到对生长因子的良好缓释, 比单纯rhBMP2 对BMSCs) Q1 n; H$ R& I% z
有更为明显的生物学效应, 可以持续促进其增殖与分化达10d 以上, 在组织工程领域有着广阔的应用前景。
. Q3 W, {6 g+ S[关键词] 骨形态发生蛋白; 右旋糖酐; 纳米微球; 缓释; 骨髓间充质干细胞  W& [6 b3 L4 }1 Q
[中图分类号] R318.08 [文献标识码] A
# m# b' F9 S. r2 P4 dPr epar ation and proper ty of r ecombinant human bone morphogenetic protein - 2 loaded hydrogel nanospher es
9 k6 X' @( J+ r" [( X0 z9 land their biological effects on the prolifer ation and differ entiation of bone mesenchymal stem cells CHEN Fa -
( u0 R0 g9 d* Y9 s6 k* gming1, WU Zhi - fen1, JIN Yan2, Wang Qin - tao1, DU Yan1, WANG Guo- fang1. (1. Department of Periodontology and) w# K2 H& P- d
Mucosal Diseases, 2. Department of Tissue Engineering Center, College of Stomatology, Forth Military Medical University.
3 N( I; e$ ?9 C: C, ^Xi'an 710032, Shanxi Province, China )' z7 {0 V& @; S: Z
[Abstr act] PURPOSE: To prepare and study the recombinant human bone morphogenetic protein- 2 loaded dextranbased: B6 X$ B7 P3 v
hydrogel nanospheres (rhBMP2- dex- NPs) sustained release system, and to evaluate its biological effects on cultured
1 ?% m/ H. M9 o5 e1 T% L; F0 ]rabbit bone mesenchymal stem cells(BMSCs) . METHODS: The rhBMP2- dex- NPs were prepared by improved emulsion
# q' w4 u( k: R& f+ Qpolymerization method. Their morphology, size and size distribution, encapsulated ratio and stability were assessed by
$ p+ O1 G: j# j. zroutine procedure. Dynamic dialysis method was used to determine the release characteristics of rhBMP2- dex- NPs in vitro.  c: O% N5 {. w6 X, d$ E
Cell culture technique and MTT colorimetric assay were used to evaluate the proliferation and differentiation of the
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- `" a/ k& ]) }0 K附件为全文，请大家支持一下 回复本贴就可以下载了+ O: a* J% B  }$ B% y6 d- d; E
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