质粒扩增时，所用到的大肠杆菌培养基是购买的还是自行配制的啊？

nkqloveme

O(∩_∩)O~近期我们实验室要扩增质粒，之前没有做过，兄弟姐妹们，谁知道需要买那些东西啊？所用的大肠杆菌LB液体和固体培养基是买的还是自己配制的啊？谢谢啊！

weiyepan

大量做肯定是自己配，小量做就买算了。

yueyongheng

以前一直用自己配的，也用过生物公司的，是买酶增的产品。效果上看不出什么差异。

bunny19870512

质粒扩增是指大量培养菌液(菌板)么?那就用普通LB嘛,配的很方便的,建议不要用膏状蛋白胨,会很不好称取的,NACL也不要太老,都成块了就不好了...混匀的时候磁力搅拌15min左右,溶液澄清时可以调节PH值,之后加上棉塞或滤膜高压就可以了..

xujie158

我们实验室LB液体和固体培养基都是自己配置的，方法很简单的，而且效果也很好！蛋白胨和酵母浸膏都是普博欣产的，NaCl是天津化学试剂厂的，Amp和kana是sigma的，感觉这些试剂要求都比较松吧，毕竟养细菌比养细胞容易得多，其条件要求也很宽泛！4 ^- {: I3 |9 K$ X( l& `
     LB液体培养基：10g Trytone ，5g Yeast Extract，10gNaCl，调PH至7.2（也可省略），最后定至1000ml，高压121，20min灭菌，4度或室温保存就可以了。固体培养基的话，别的与液体培养基相同，只是在调好后加入15克琼脂粉（注意琼脂粉不溶，只有高压后才能溶解，所以需要分装的话，先分装后再加入琼脂粉），再定容至1000ml。! i6 n% a# w8 y/ G9 ?
    抗生素一般要求是50~100ug/ml，我们一般把都把其配成溶液，浓度100ug/ul，添加时是1ml培养基加入1ul抗生素！
( `% q+ k3 a4 p* ~5 k    固体培养基倒板前加入抗生素，温度不宜过高，一般50~60°为宜，太高温度会导致抗生素效价降低！我们高压灭菌锅带有自动保温功能，都是保温到50的。

hdc2001

自己配啊，很便宜的。盐有高盐和低盐，根据实验情况选择。高压前调pH 7.0。

cactus.X

" g% P2 A0 s0 h4 V% H5 e2 J, E
5 Z5 l" `5 u- Z" x  f$ [8 U5 ZLB培养基建议自己配，很容易，LB培养基放置太久的建议不用。我们实验室经常用，配方和五楼提供的一样：, G: i8 b. Y. a8 x9 z
LB液体培养基配制方法：10g蛋白胨（Trytone），5g酵母浸出物（Yeast Extract），10g氯化钠，定容至1000ml，高压灭菌，4度保存备用就行了。根据载体的抗性基因添加一定量的抗生素，Amp一般的添加量是50-100ug/ml
7 J5 \- Y8 S5 }) E2 D. `/ ~LB固体培养基的配制方法：10g蛋白胨（Trytone），5g酵母浸出物（Yeast Extract），10g氯化钠，琼脂粉15g，定容至1000ml，高压灭菌，等温度降至50-60度时添加相应抗生素，然后倒板，封口袋装起来，置4度冰箱备用。Amp一般的添加量是50-100ug/ml。
0 o$ L1 ?) \3 ^; `! p$ v不过我们一般把抗生素配成溶液，根据质量浓度通过单位转化配成一定物质的量浓度，然后以后按“1ul抗生素--1ml培养基”添加。这样比较方便！

juanjuan5891

一般自己配置然后高压灭菌就可以用了

军医

这东西自己配了，高压就可以了。常用的菌种实验室一般都有保存吧

绿雪

一般都是自己配的，很简单。
8 ]- a7 i0 \* }! XLB液体培养基配制方法：10g蛋白胨（Trytone），5g酵母浸出物（Yeast Extract），10g氯化钠，定容至1000ml，高压灭菌，4度保存备用就行了。根据载体的抗性基因添加一定量的抗生素，Amp一般的添加量是50-100ug/ml。, |- J( |  ^# P: b4 C' g1 q# i
LB固体培养基的配制方法：10g蛋白胨（Trytone），5g酵母浸出物（Yeast Extract），10g氯化钠，琼脂粉15g，定容至1000ml，高压灭菌，等温度降至50-60度时添加相应抗生素，然后倒板，封口袋装起来，置4度冰箱备用。Amp一般的添加量是50-100ug/ml。4 b6 d" k* V0 C7 u% w" M
配制时可根据自己使用量的大小，按比例增减各种成分。