关于染色体核型分析如何做

qingnuanrenxin

干细胞 一般是这样的：
4 v2 F% j% R3 h) Y" V  1，传代后72小时左右，加0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养中  培养2-4小时，消化收集，离心弃上清。 7 }- y3 a) i6 Q5 N
  2，0.75M低渗液（KCL）10ml   37°水浴30分钟  
7 A! U4 V; }9 y" j: r! b  3，加1ml固定液 与固定  37°水浴3分钟  离心弃上清。
- T5 J1 J: U8 d: V/ j) l% _) N- h: k  4，用8ml固定液于离心管中，吸打均匀  37°水浴20-30分钟。3 d5 C6 E; d" n' ~; d
  5，重复4 二固定  
6 ^1 E& G  M" ~$ C6 I, N6 R" S6 M  6,50cm高处1-2滴细胞悬液滴于湿冷的载玻片上  自然风干。
! f3 }$ K$ D& g! N6 ?0 @  7。 百分之十 吉姆萨染液染10分钟   蒸馏水洗干  室温风干  
$ _# z* O4 ?: w7 @! s  8，片子干后 电子显微镜观察，0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养液中  培养2-4小时，

qingnuanrenxin

这是别人发给我的资料  给大家共享下。

lixiaodong

谢谢。

flydayzhu

谢谢~

hawkyiger

过程太简略，还有不少错误
; u2 R" M0 }5 q# C- Z# r1. 中间的离心步骤都省略了，容易误解，一般为1000-1500r/min，时间8-10min
. Y, g- U; m$ j! ^2. 核型分析低渗液浓度应为0.075M，0.75M怎么伸展膨胀。。。- s2 J( a, `# U! Q. l" r5 ?8 F5 t
3. 制片后要经过适当的老化步骤，即标本置于密闭盒中室温放置，否则G带不明显。. O& n% {2 Y0 [" t
4. 吉姆萨染色前要0.25%胰酶短暂处理，

future007

楼上说的很对，希望楼主下次注意呦

天鹅骨

请问有没有地方可以代做动物染色体核型分析的呢? 因为我要做大鼠的,一般医院里都只做人的,他们说不会看大鼠的染色体.
% O2 r; Z" G) Q: r- u2 G0 |/ }还有,不同细胞的制片方法一样吗?

天鹅骨

再补充两个问题哦
( @! A! z& g8 x7 D- d请问做核型分析需要的细胞量是多少呢? 6 K9 n# d' L9 Y- X; {1 p
我上次养了瓶T75 还特意去做了细胞分选 把我的细胞和feeder细胞分开, 分到10^6细胞,觉得不少了, 拿到医院, 医院居然说要10^7 才够!10^6太少,不给我做! 那我岂不是要养10瓶T75才够?那样也太浪费了吧! 但也听有公司说2个T25就行,究竟要多少呢?2 J% d* Y. E, |5 e. ^" A
还有, 大家做iPS ES 的核型分析时, 都是怎么把干细胞与feeder分开的呢?是流式分选?还是feeder-free 培养? 我的细胞没有做过feeder-free呢^
1 d. Z% b( a! L0 D5 J% u, ?恳请大家指教啊!
4 F& O; O$ {" X" Q8 ~& y4 Y先谢各位了!

qingnuanrenxin

这是我问别人，别人给我的资料  我拿出来给大家分享下  如果有什么不对的地方大家指出这样才可以拿一份完整的资料，共同进步啊

qingnuanrenxin

大家踊跃发言啊