关于染色体核型分析如何做

qingnuanrenxin

干细胞 一般是这样的：
) w; g5 g  {) ^3 A! B1 Z# l  1，传代后72小时左右，加0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养中  培养2-4小时，消化收集，离心弃上清。
3 _$ f2 @. ~& ]  2，0.75M低渗液（KCL）10ml   37°水浴30分钟  
3 k" n) O: c  L; i' q  3，加1ml固定液 与固定  37°水浴3分钟  离心弃上清。
4 u' Z4 R: t, J7 s2 f$ t1 C  4，用8ml固定液于离心管中，吸打均匀  37°水浴20-30分钟。
" `  u/ {3 K- U% c$ }  5，重复4 二固定  " H! X$ v- E' K: j" {
  6,50cm高处1-2滴细胞悬液滴于湿冷的载玻片上  自然风干。
! K( Y& P6 x  \4 y  7。 百分之十 吉姆萨染液染10分钟   蒸馏水洗干  室温风干  
9 i2 B: Q: r$ o; J* j; e  8，片子干后 电子显微镜观察，0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养液中  培养2-4小时，

qingnuanrenxin

这是别人发给我的资料  给大家共享下。

lixiaodong

谢谢。

flydayzhu

谢谢~

hawkyiger

过程太简略，还有不少错误: n/ D! K1 D6 r) r% L
1. 中间的离心步骤都省略了，容易误解，一般为1000-1500r/min，时间8-10min( u* ~! m% P* d% [* O
2. 核型分析低渗液浓度应为0.075M，0.75M怎么伸展膨胀。。。
0 X% J! M) g" X  o/ z( x* R9 J3. 制片后要经过适当的老化步骤，即标本置于密闭盒中室温放置，否则G带不明显。& k! v" r1 P  D& x* Y
4. 吉姆萨染色前要0.25%胰酶短暂处理，

future007

楼上说的很对，希望楼主下次注意呦

天鹅骨

请问有没有地方可以代做动物染色体核型分析的呢? 因为我要做大鼠的,一般医院里都只做人的,他们说不会看大鼠的染色体.
: f: I9 X  J7 q还有,不同细胞的制片方法一样吗?

天鹅骨

再补充两个问题哦
: J4 h5 x- {5 w9 L请问做核型分析需要的细胞量是多少呢? 4 a$ s) c& @0 x3 L' \% Z
我上次养了瓶T75 还特意去做了细胞分选 把我的细胞和feeder细胞分开, 分到10^6细胞,觉得不少了, 拿到医院, 医院居然说要10^7 才够!10^6太少,不给我做! 那我岂不是要养10瓶T75才够?那样也太浪费了吧! 但也听有公司说2个T25就行,究竟要多少呢?: V4 ]6 K" c* A1 Q  @
还有, 大家做iPS ES 的核型分析时, 都是怎么把干细胞与feeder分开的呢?是流式分选?还是feeder-free 培养? 我的细胞没有做过feeder-free呢^) s5 @; |2 N# A
恳请大家指教啊!: D/ k& `( L/ N/ y' V+ E4 M# H% ~
先谢各位了!

qingnuanrenxin

这是我问别人，别人给我的资料  我拿出来给大家分享下  如果有什么不对的地方大家指出这样才可以拿一份完整的资料，共同进步啊

qingnuanrenxin

大家踊跃发言啊