关于染色体核型分析如何做

qingnuanrenxin

干细胞 一般是这样的：7 U8 j5 E# j! r9 ?
  1，传代后72小时左右，加0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养中  培养2-4小时，消化收集，离心弃上清。
' p" ?! n' `/ g, x* v# X  2，0.75M低渗液（KCL）10ml   37°水浴30分钟  
; \! r* b9 v$ d7 ^! M2 x  3，加1ml固定液 与固定  37°水浴3分钟  离心弃上清。
6 f, z) x8 ?) e! n" Y$ S9 p) J  4，用8ml固定液于离心管中，吸打均匀  37°水浴20-30分钟。
: a5 u, h# B0 h2 R+ w4 H  5，重复4 二固定  1 |2 D. q( E( \
  6,50cm高处1-2滴细胞悬液滴于湿冷的载玻片上  自然风干。% D9 Z' |# Q0 x1 k* w" D
  7。 百分之十 吉姆萨染液染10分钟   蒸馏水洗干  室温风干  
' o) ^# |& @" W; i1 t/ n* h  8，片子干后 电子显微镜观察，0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养液中  培养2-4小时，

qingnuanrenxin

这是别人发给我的资料  给大家共享下。

lixiaodong

谢谢。

flydayzhu

谢谢~

hawkyiger

过程太简略，还有不少错误
8 Q5 s2 b* t9 T# F4 T2 X1. 中间的离心步骤都省略了，容易误解，一般为1000-1500r/min，时间8-10min
( `; {9 \7 P: f4 P0 z2. 核型分析低渗液浓度应为0.075M，0.75M怎么伸展膨胀。。。4 {  w4 a9 `$ j4 ]# C
3. 制片后要经过适当的老化步骤，即标本置于密闭盒中室温放置，否则G带不明显。
! k0 `' j) V2 j* T4. 吉姆萨染色前要0.25%胰酶短暂处理，

future007

楼上说的很对，希望楼主下次注意呦

天鹅骨

请问有没有地方可以代做动物染色体核型分析的呢? 因为我要做大鼠的,一般医院里都只做人的,他们说不会看大鼠的染色体.8 g5 w/ J0 V/ N& e( q# q
还有,不同细胞的制片方法一样吗?

天鹅骨

再补充两个问题哦5 w- p6 \  j4 {# F$ C
请问做核型分析需要的细胞量是多少呢?
" r$ T( |" W7 Z4 }5 ]我上次养了瓶T75 还特意去做了细胞分选 把我的细胞和feeder细胞分开, 分到10^6细胞,觉得不少了, 拿到医院, 医院居然说要10^7 才够!10^6太少,不给我做! 那我岂不是要养10瓶T75才够?那样也太浪费了吧! 但也听有公司说2个T25就行,究竟要多少呢?& U5 z5 U2 V+ j/ Q7 x1 }4 Q
还有, 大家做iPS ES 的核型分析时, 都是怎么把干细胞与feeder分开的呢?是流式分选?还是feeder-free 培养? 我的细胞没有做过feeder-free呢^3 m' z' V" T# g2 Z  C; O
恳请大家指教啊!# b/ G9 O5 T& T1 Q- g) F
先谢各位了!

qingnuanrenxin

这是我问别人，别人给我的资料  我拿出来给大家分享下  如果有什么不对的地方大家指出这样才可以拿一份完整的资料，共同进步啊

qingnuanrenxin

大家踊跃发言啊