求助关于胚胎干细胞一传代就分化，状态极为不好

是鸟就要去飞

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我养的胚胎干细胞一传代就分化，状态极为不好，我们以前的培养基成分没有变过。后来就分析，换了个L-GLU，之后状态好了一小点，后来又借了别人的培养基培养，发现状态好了一些，因为之前借的别人的培养基成分是别人拷贝我们的，所以现在十分困惑

guosapphire

叙述太模糊了，请详细描述。比如是什么物种的ES，什么feeder。。。。最好辅以照片。

随风的天使

回复 1# 是鸟就要去飞 8 t/ Q% R' i' {1 E6 m
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1 ^3 C& b1 Q1 j8 N    请问楼主养的是什么的胚胎干细胞？

juan880929

看看是不是你的培养基的ph值不对，再有就是看看你所加的药品有没有过期的，如果细胞状态不好，可以在接种前在明胶上悬浮40分钟，这样分化的细胞就会贴到明胶上，然后再接种

周会

我也有这样的情况7 X* \4 u. K5 V; L$ F
不知道怎么控制条件呢

是鸟就要去飞

对不起我有的没说清楚，我们也做Gelatin包被培养皿，用的所有培养基都没有过期，feeder问题可以排除，因为同样的feeser在借来的培养基上培养es就没问题，Feeder为STO的snl细胞系，ES是NN5，不知道有没有人养过？还有PH值测过，没问题。ES长不成克隆，但是第二，三天培养基有变黄，我们每天换新鲜培养基，估计这样因该是ES分化了。借来的配置好的培养基和我们的成分是一样的，于是我们就又借来了他们的DMEM，换上我们的血清，PS,L-GLU,2-ME，可是还不行。不知我说的情况你们了解了么

是鸟就要去飞

要说PS有问题，无非就是失效了，但是有没有PS对ES培养也起不了作用。L-GLU，我们也测试了，之前养的ES状态非常好。2-ME也是同一批号的产品。血清为自己测试的，大量购入后分装，血清一直冻在-20°中，要用的头天在4°中过夜缓慢溶化。头疼此事啊

maozhuxiwo1

回复 6# 是鸟就要去飞
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8 a# C$ V; s2 ]  g7 N% W7 Y' w8 M
  E5 f. _7 q( x$ Q+ V1 M: P1 j    恩，培养基都是借来的话，那你的完全培养基里面应该是血清出问题了啊。我用的都是血清替代物，因为普通的FBS对hES有很大的影响。- _7 i6 b4 s3 q. x4 x
  你可以试试所有东西都从源头查起，自己分装血清和双抗。一点点查出问题在哪里吧。# ~4 \; ?# D- _9 L5 ?4 c1 C! f2 P
  出现这种问题真的很恼人啊，希望你的细胞尽快好起来吧

是鸟就要去飞

问题反复，我们在查，源头一件一件的事都在查，试验记录都翻破了

是鸟就要去飞

出现问题我不怕，怕的是时间