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求助关于胚胎干细胞一传代就分化,状态极为不好   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-7-15 11:20 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 细胞海洋 于 2010-7-15 11:57 编辑 * U% K' K* Y% Y' c( c0 t
2 y9 ]) H. N+ i8 C) g  M' r
我养的胚胎干细胞一传代就分化,状态极为不好,我们以前的培养基成分没有变过。后来就分析,换了个L-GLU,之后状态好了一小点,后来又借了别人的培养基培养,发现状态好了一些,因为之前借的别人的培养基成分是别人拷贝我们的,所以现在十分困惑
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沙发
发表于 2010-7-15 12:03 |只看该作者
叙述太模糊了,请详细描述。比如是什么物种的ES,什么feeder。。。。最好辅以照片。
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藤椅
发表于 2010-7-15 12:04 |只看该作者
回复 1# 是鸟就要去飞 + q1 X4 P, I: p3 l
' w% j: {0 u" a3 M1 d2 X
7 L, s& {  D1 j& }# ^; T/ t
    请问楼主养的是什么的胚胎干细胞?

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板凳
发表于 2010-7-15 12:27 |只看该作者
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看看是不是你的培养基的ph值不对,再有就是看看你所加的药品有没有过期的,如果细胞状态不好,可以在接种前在明胶上悬浮40分钟,这样分化的细胞就会贴到明胶上,然后再接种
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报纸
发表于 2010-7-15 13:00 |只看该作者
我也有这样的情况
7 D) ]4 \0 g6 Q/ h  @, W, G& q" v不知道怎么控制条件呢

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地板
发表于 2010-7-15 13:04 |只看该作者
对不起我有的没说清楚,我们也做Gelatin包被培养皿,用的所有培养基都没有过期,feeder问题可以排除,因为同样的feeser在借来的培养基上培养es就没问题,Feeder为STO的snl细胞系,ES是NN5,不知道有没有人养过?还有PH值测过,没问题。ES长不成克隆,但是第二,三天培养基有变黄,我们每天换新鲜培养基,估计这样因该是ES分化了。借来的配置好的培养基和我们的成分是一样的,于是我们就又借来了他们的DMEM,换上我们的血清,PS,L-GLU,2-ME,可是还不行。不知我说的情况你们了解了么
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发表于 2010-7-15 13:08 |只看该作者
要说PS有问题,无非就是失效了,但是有没有PS对ES培养也起不了作用。L-GLU,我们也测试了,之前养的ES状态非常好。2-ME也是同一批号的产品。血清为自己测试的,大量购入后分装,血清一直冻在-20°中,要用的头天在4°中过夜缓慢溶化。头疼此事啊
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发表于 2010-7-15 13:13 |只看该作者
回复 6# 是鸟就要去飞 ) a. g7 t  @, X, N6 d* T3 W( D
4 X6 U0 u1 G# }2 a4 F
7 D1 ?5 F9 L, F0 R$ u; {
    恩,培养基都是借来的话,那你的完全培养基里面应该是血清出问题了啊。我用的都是血清替代物,因为普通的FBS对hES有很大的影响。
: k% W0 }  E4 c6 Q( u3 W  你可以试试所有东西都从源头查起,自己分装血清和双抗。一点点查出问题在哪里吧。7 k7 r% F5 g* m. g8 I$ Y
  出现这种问题真的很恼人啊,希望你的细胞尽快好起来吧
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发表于 2010-7-15 13:21 |只看该作者
问题反复,我们在查,源头一件一件的事都在查,试验记录都翻破了

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发表于 2010-7-15 13:22 |只看该作者
出现问题我不怕,怕的是时间
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