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电泳时电压不应该超过5 v/cm,注意此处的距离指的是正负电极之间的距离,而不是凝胶的长度!通过测量,我们是用的电泳槽正负极距离大概是27cm(谢谢黄菲同学提供直尺),故电泳电压宜《27*5=135V(对于PCR产物来说,更应该低于这一数值,110~120V就行了)。平时我们用的170~180V都是太高了。
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电泳温度应该低于30℃,对于巨大的DNA电泳,温度应该低于15℃(所以电泳房工作状态下必须开空调!)。* i# j2 s X0 A% B8 N+ s% _
注意如果电泳时电压和温度过高,可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段(我们muc13的PCR片段大小应该在300bp左右,更应注意)跑出胶而出现缺带现象! |
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