我养的大鼠骨髓间充质干细胞的图片，是老化了吗

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养了两个月的干细胞，大鼠、小鼠都养过，全骨髓法培养，但是结果不好，细胞不是死了就是老化了，老化是师姐说的，我自己不清楚这是否算老化。之前有个TX发过帖子，他的细胞跟我的很相似，很多TX回帖说是老化。我也把我的图片传上来，大家来看看。

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分别是两个视野，100倍和200倍各照了一张。细胞是培养第7天的时候。我养了好几瓶细胞，在前5天，感觉状态不错，长着长着，细胞就长成多边形了，师姐称之为老化，到10天左右，细胞全部连成一大片

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前5天不错，后面就成四角形? 老化？...按时换液怎么会由状态好到不好呢？尤其是前几天状态好应该和接种密度 ...
& m; N2 |( b# z* @2 q& j; J9 j/ kbingo 发表于 2010-7-26 15:30

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谢谢大家的讨论。我是72小时首次换液，此后3天换液，接种密度是2X10^6，一只大鼠装一瓶（50ml ），我想这个密度应该很大了吧5 z: l6 V; e# T. t6 P) K8 i+ G0 B
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可能是老化了 你的细胞浓度的确不高 如果取材少建议装到25ml的培养瓶中 这样容易长满 提前传代 就不会老化了 ...
: f$ i! F4 u! S大海 发表于 2010-7-26 19:30

2 P2 a) }- V/ ]. Z. k我现在就是疑惑老化的原因，根据大家的讨论，老化和细胞接种密度有关系。我是一只大鼠培养一瓶，细胞计数是2X10^6。我也准备下次提前传代呵呵

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我冒昧的说句，我感觉你养的不是间充质干细胞，或者纯度很小，大部分是成纤维，所以很快老化，你做诱导实验 ...; p8 I0 e! o5 K% q) h% o, J
feifei105 发表于 2010-7-28 16:47

2 L2 f  |2 Q5 G5 Y6 e0 p' T1 z恩，谢谢你的讨论。之前也有TX说是成纤维，所以老化。我还没做诱导实验，本想传代后才做。细胞养成这样，都没能传代，下面一步都不想做了

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你的细胞要长多久才能融合到80%-90%？胰酶消化时间多长？
; x0 ~9 w- W  f5 K3 {/ g我也发现密度大的瓶子，细胞不会铺的太开，不知道 ...% D4 b! x- M% @! u0 `( k8 v9 z
小熊不杀生 发表于 2010-7-28 08:23

: P( z% _2 f  m. C& x我的细胞大概5-7天，就成集落样聚集生长，瓶底的视野呈现出来就是这儿一片，那儿一片，细胞全部黏在一起，说实在话，我都搞不清楚有没有融合到80-90%。我最近消化过一次，胰酶消化时间4分钟，贴壁细胞几乎没动静，仅有少量细胞漂浮，我没敢继续消化，赶紧加了血清就传代了，离心后细胞很少，明天我再去看生长情况，估计不会很好

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你是不是在传代时，消化时间太久了，也会出现上面情况$ _2 g! [  n- U3 A' {: ~; y; k
chendongbo338 发表于 2010-7-27 17:24

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恩，消化过度肯定对细胞有影响。我上传的图片是没有传代前，培养了7天左右吧，细胞形态就感觉不对了，养了好几瓶都是这样

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MSC传代多了，也会老化比，如到P6代就会出现老化，成纤维细胞就会多些，细胞量会下降很快。二到三代做实验最 ...4 x( z/ f4 Q, [( n, A) e
chendongbo338 发表于 2010-7-29 14:19

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3 m/ J* T6 T* U1 E& wBMSC第一次传代不是7-10天左右吗，我看过的文献有这么讲的，所以我养到了七天，如果状态好我就会开始传代。今天去看了一下传了第一代后的细胞，没想到状态还不错，形状、数量都比没传代前好。我就是准备用二到三代的细胞做下一步的实验，这两代的细胞活力最好。